山羊脂肪间充质干细胞的体外分离培养与定向分化-动物学专业论文.docxVIP

山羊脂肪间充质干细胞的体外分离培养与定向分化 山羊脂肪间充质干细胞的体外分离培养与定向分化 摘要 脂肪间充质干细胞(adipose—derived stromal cells，ADSCs)在不同种类的动 物细胞中越来越受到人们的关注。虽然从实验动物(如大鼠)脂肪组织中已经分 离出大量脂肪间充质干细胞并进行了相关的研究，但对于家畜的脂肪间充质干 细胞(如山羊)却研究的很少。 为了分离和培养山羊脂肪间充质干细胞，本实验借鉴分离大鼠脂肪间充质 干细胞的方法体外分离培养山羊脂肪间充质干细胞、进行定向诱导培养并与大 鼠脂肪间充质干细胞进行比较。结果本实验分离得到的山羊脂肪问充质干细胞 在体外增殖稳定，经过多次传代后染色体仍保持正常的二倍性，但在相同接种 密度和培养条件下，山羊脂肪间充质干细胞比大鼠脂肪间充质干细胞分裂增殖 速度更快。山羊和大鼠脂肪间充质干细胞经CD49d和CDl3染色呈阳性，CD34、 CDl06呈阴性，RT-PCR显示CD44表达呈阳性；成骨诱导后经茜素红染色后均 可见明显的骨结节、ALP染色后细胞均呈阳性且表达Osteocalcin；不同的是山 羊脂肪间充质干细胞经成骨诱导后形成的骨化结比大鼠脂肪间充质干细胞经诱 导后形成的骨化结大且ALP染色更深。两种细胞成脂诱导后经O一油红染色后均 有红色脂滴出现在细胞周围且表达PPART2，不同的是山羊脂肪间充质干细胞诱 导后形成的脂滴比大鼠脂肪间充质干细胞诱导后形成的脂滴多且大。应用贴壁 培养法、三维培养法和悬滴培养法对两种细胞进行成软骨诱导，诱导后经阿新 蓝染色均有软骨陷窝形成且表达COL2A1，不同的是在大鼠脂肪间充质干细胞 软骨分化诱导实验中，悬滴培养法诱导后形成的软骨陷窝数量较多、形态更好， 在山羊脂肪间充质干细胞软骨分化诱导实验中，贴壁诱导培养法和悬滴诱导培 在山羊脂肪间充质干细胞软骨分化诱导实验中，贴壁诱导培养法和悬滴诱导培 养法效果均好于三维诱导培养法，且形成的软骨陷窝数量多、形态好，但贴壁 诱导培养法和悬滴诱导培养法两者相比较并无明显差异。 研究结果表明本实验中已经得到纯度较高的山羊和大鼠脂肪间充质干细 胞。 关键词：脂肪间充质干细胞，体外分离培养，细胞鉴定，细胞定向诱导培养 ’。———、、 1奴、 ．。—．／ 4 ISOLATION，EXPANSION，AND ISOLATION，EXPANSION，AND DIFFERENTIATION OF GOAT ADIPoSE．DElUVED STEM CELLS ABSTRACT ADSCs(adipose-derived stromal cells)are being gotten more and more attention in different types of animal cells research．Although ADSCs have been obtained from experimental animals adipose tissue(eg．rats)and carried out in relevant studies，but few ADSCs studies have been reporteded on livestock(eg． goats)． In this research a method of rat ADSCs isolation was used to isolate ADSCs from goat adipose tissue，Compared with rat ADSCs，goat ADSCs were to established and directed differentiated．The results showed that goat ADSCs cells had normal diploidy after subculture．Proliferation of goat ADSCs was faster than rats cells in the same conditions．Both rat and goat ADSCs stained positively for CD49d，CD44 and CD 1 3，but stained negatively for CD34 and CD 1 06．Bone nodules were apparent，and alizarin staining was positive after osteogenic induction．Cells expressing osteocalcin were positive by alkaline phosphatase(ALP)staining．Af