实验二 血涂片制备 白细胞分类计数.pptVIP

方法与步骤 再取另一张边缘光滑的双凹片，斜置于血滴的前缘，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展开成线状。 两玻片的角度以30-45°为宜，轻轻将双凹片向前匀速推进，即涂成血液薄膜。 染色 浓染：待涂片在空气中完全干燥后，滴加数滴Wright’s染液盖满血膜为止，染色3～5 min。 淡染：然后滴加等量缓冲液，使其与染液均匀混合，静置10～15 min。用流水冲去染液，吸水纸吸干，镜检。 各类成熟白细胞的形态学： 中性粒细胞（Ne）：在瑞氏染色血涂片上呈圆形，直径10～13μm，胞浆染粉红色，核形一叶（杆状核）至五叶不等，以三叶者多见，染成深紫红色，胞浆中有许多细小均匀紫红色颗粒。 嗜酸性粒细胞（Eo）：较中性粒细胞稍大，胞核多为两叶，呈眼镜、八字形，核染色质粗糙染深紫红色，胞浆内充满粗大均匀的嗜酸性颗粒，瑞氏染色时呈桔红色，有折光性。 嗜碱性粒细胞（Ba）：胞浆中含有大小不等的嗜碱性颗粒，瑞氏染色时呈兰黑色。于光学显微镜下常见胞浆中有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易溶于水或因功能活动而脱颗粒所致；核呈淡紫红色常看不清，呈杆状或分叶状。 淋巴细胞（Ly）：胞体呈圆形，直径介于6～15μm之间，在成人血涂片中以小淋巴细胞为多见，直径6～9μm，核大呈深紫色致密而浓染，胞浆量极少；大淋巴细胞胞浆量较多，呈清澈的淡蓝色，可见少量嗜苯胺蓝颗粒，胞核圆或椭圆，常偏向细胞一侧，染色较深。 单核细胞（Mo）：在瑞氏染色涂片上为12～20μm，胞体圆形、椭圆形或不规则形；核形多种多样，最重要的特点是染色质较细致疏松，呈丝网状或条缕状，着色较淡胞浆较多，淡兰色，含大量细小尘土样颗粒。 * 实验二 血涂片制备染色及白细胞分类计数 临床检验基础实验 王 梅 江苏大学基础医学与医学技术学院 临床检验与输血教研室 涂片技术是制备血液样品最常用的技术。将血液样品制成单层细胞的涂片标本，染色后可对血液中各种细胞形态进行形态观察、细胞计数、细胞大小测量等工作。 血涂片制备 推片 载玻片 血液 一张满意的血涂片应厚薄均匀 头 体 尾鲜明 涂片干燥后用铅笔在血涂片的头 部写上姓名和编号 李四 B 1 2 3 推片：挤出第二滴血置于载玻片的右侧 30~45° 血涂片 不良血涂片 实验用品 器材: 医用一次性采血针、酒精棉球、经脱脂洗净的载玻片 、双凹片（推片） 。 试剂: Wright’s（瑞氏）染液：Wright’s色素粉末0.1g，溶于60 ml甲醇。 瑞氏染色原理 瑞氏粉是由伊红和美蓝混合后组成的一种中性盐染料。伊红是 一种酸性染料，为伊红钠盐，其有色部分为阴离子；美蓝是一种碱 性染料，为氯化美蓝，有色基团为阳离子。如以M+代表美蓝，以 E-代表伊红。将适量的ME溶解在甲醇中，即成为瑞氏染液。 甲醇的作用可使ME溶解，解离为M+和E－，这两种有色离子可以选择性地吸附血细胞内的不同成分而着色。 各种细胞及细胞的各种成分由于其化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样，因此，在血片上可以见到不同的着色。细胞中碱性物质与酸性染料伊红结合染成红色 ；细胞中的酸性物质可与染液中的碱性染料美蓝结合染成蓝色 ；当细胞含酸、碱性物质各半时，它们既与酸性染料作用，又与碱性染料作用，染成淡紫红色。 瑞氏染色原理 血涂片染色 勿冲洗再加瑞氏染色Ⅱ液5-8滴后将Ⅰ液和Ⅱ液充分混匀静置10分钟 直接流水冲洗3-5分钟 （切勿先倒掉染液） 涂片经水洗干燥后用油镜 分类计数100个白细胞 李四123 涂片干燥后加瑞氏染色Ⅰ液5-8滴覆盖整个血膜1分钟 血涂片的观察 低倍镜观察 1.染色情况(满意、偏酸、偏碱） 2.细胞分布情况 油镜下分类计数：体尾交界处。 油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。（共计数100个白细胞） 李四123 体尾交界处 理想区域 细胞重叠 细胞太稀 理想区域 *