大肠杆菌II型丙酮酸激酶的纯化分析及其作为偶联酶的应用.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３，３３（５）：６８７４ 大肠杆菌ＩＩ型丙酮酸激酶的纯化分析 及其作为偶联酶的应用 １ １ １ １，２ １ 李鸿艳 　周思甜 　马建辉 　王艳兴 　孙梅好 （１浙江师范大学化学与生命科学学院　金华　３２１００４） （２中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所　上海　２０００３１） 摘要　目的：分析大肠杆菌ＩＩ型丙酮酸激酶（ｐｙｒｕｖａｔｅｋｉｎａｓｅＩＩ，ＰＫＩＩ）的酶学特性及其作为偶联酶 的可行性。方法：ＰＣＲ法从大肠杆菌基因组克隆ｐｋＩＩ，构建入原核表达载体ｐＳＫＢ４，经ＩＰＴＧ诱导 表达、纯化获得ＰＫＩＩ。利用乳酸脱氢酶偶联法分析其催化ＡＤＰ、ＧＤＰ、ＵＤＰ、ＣＤＰ磷酸化的能力以 及不同ｐＨ、温度对其活性的影响，并利用ＰＫＩＩ作为偶联酶对球形红细菌硫酸盐活化复合体 （ｓｕｌｆａｔｅａｃｔｉｖａｔｉｎｇｃｏｍｐｌｅｘ，ＳＡＣ）及其突变体进行了活性