利用单细胞PCR方法生产人源化单克隆抗体的探索-生物学;生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

南开大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所取 南开大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所取 得的研究成果。除文中已经注明引用的内容外，本学位论文的研究成果不包含任 何他人创作的、已公开发表或者没有公开发表的作品的内容。对本论文所涉及的 研究工作做出贡献的其他个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本学位论文 原创性声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者签名： 值童壹 2011年5月16日 非公开学位论文标注说明 根据南开大学有关规定，非公开学位论文须经指导教师同意、作者本人申请 和相关部门批准方能标注。未经批准的均为公开学位论文，公开学位论文本说明 为空白。 论文题目 申请密级 口限制(≤2年) 口秘密(410年) 口机密(420年) 保密期限 20 年 月 日至20 年 月 日 审批表编号 批准日期 20 年 月 日 限制-A-2年(最长2年，可少于2年) 秘密★10年(最长5年，可少于5年) 摘要摘要 摘要 摘要 目的：抗体在免疫系统的功能中扮演着极为重要的角色。如何有效快速地生 产抗体成为大家关心的问题。至1975年Milstein和Kohler所发明了经典的 杂交瘤单克隆抗体生产方法以来，生产单克隆抗体的技术不断发展，至今 已经有多种有效的生产单克隆抗体的方法，如杂交瘤技术，噬菌体展示技 术等等。目前，基因工程抗体的研究非常火热，而且在实际生产中已经得 到了应用。本文中，作者探讨一种非常新颖有效的人源化单克隆抗体生产 的方法，揭示出这种方法的广阔前景。 方法：本研究中的生产完全人源化单克隆抗体的方法是基于目前流行的基因 工程抗体技术和单细胞PCR技术进行的。通过从免疫完成的患者体内取出外周 血，分离外周血中的B细胞，并根据不同的实验课题特征分选出不同亚群的B 细胞，将B细胞梯度稀释成单位体积1个细胞，然后将单位体积的细胞悬液加入 到96孔细胞板中，直接裂解细胞，加入PCR体系进行多轮PCR以扩增出抗体分 子的可变区。然后将此可变区克隆进包含有抗体其他部分基因的载体，共转染构 建完成的轻链和重链载体进293T细胞，一定时间的培养后，收集细胞培养上清， 检测并分离其中的抗体。 结论：通过本研究的探索，我们发现用单细胞PCR的办法生产全人源化单克 隆抗体的办法完全可行。通过对实验的改进，这种办法不仅可以用于科研寻找抗 肿瘤单克隆抗体，也可以用于实际生产。单细胞PCR产生单克隆抗体的办法是一 种很有前途的办法。 关键字：单细胞PCR浆细胞人源化单克隆抗体基因工程抗体抗肿瘤单克 隆抗体 AbStractAbst AbStract Abst ract Purpose：antibody plays critical roles in the function of immune system．It is a well-concerning problem about how to effectively produce antibody Many ways to produce monoclonal antibodies have been developed since the famous method WaS invented by Milstein and Kohler in 1 975，which is often called hybridoma technique． The methods that are widely used nowadays are the classical hybridoma technique， phage display technique and CDR transfer technique．In this study,the author explored a new but very effective method of producing completely human origin monoclonal antibody,which is shown to have a very splendid future． Method：this study is based on the recently popular method of producing antibodies 一genetic antibody technology．After draw a ceatain amount of peripheral blood from patients who were lately immunized with certain antigen an