第九章 酶免疫技术.pptVIP

酶免疫技术的核心组成部分 酶结合物（conjugate） 酶标记物 通过化学反应或免 疫学反应，让酶与 抗体或抗原形成的 结合物 二、酶标记抗体或抗原 * 感谢你的观看 2109年5月18日 抗原要求纯度高，抗原性完整 抗体需要特异性好、效价高、亲合力强以及比活性较高，能批量生产，易纯化。 制备方法要求 酶标记抗体或抗原 * 感谢你的观看 2109年5月18日 制备方法要求 技术方法简单、产率高，重复性好 标记反应不影响酶和抗原或抗体的活性 酶标记物稳定 ，不形成聚合物 酶标记抗体或抗原 * 感谢你的观看 2109年5月18日 制备方法 过碘酸钠法（直接法） 常用于HRP标记抗体或抗原 戊二醛交联法 酶标记抗体或抗原 * 感谢你的观看 2109年5月18日 戊二醛交联法 戊二醛分子中有两个相同的醛基，可分别与HRP和蛋白质分子中的氨基结合。该法有一步法和二步法。二步法标记效率比一步法高，酶标记物质量较均一。 酶标记抗体或抗原 * 感谢你的观看 2109年5月18日 纯化及鉴定 标记完成后应除去反应液中的游离酶、游离抗体或抗原、酶聚合物以及抗体或抗原聚合物，避免游离酶增加非特异显色，以及游离抗体或抗原起竞争作用而降低特异性染色强度 常用的纯化方法： 葡聚糖凝胶G-200/G-150过柱层析纯化 50%饱和硫酸铵沉淀提纯 酶标记抗体或抗原 * 感谢你的观看 2109年5月18日 固相抗体或抗原是非均相酶免技术中将游离和结合的酶标记物迅速分离的最常用方法 固相抗体或抗原就是把抗体或抗原结合到固相载体的表面 三、固相载体 * 感谢你的观看 2109年5月18日 要求 结合抗体或抗原的容量大 抗体或抗原牢固地固定在其表面 不影响免疫反应性 利于反应充分进行 固相方法简便易行，快速经济 种类 塑料制品 微颗粒 膜载体 固相载体 * 感谢你的观看 2109年5月18日 将抗原或抗体结合于固相载体 用1%～5%的牛血清白蛋白或5%～20%小牛血清消除固相载体表面未结合的位点，消除非特异性吸附 包被coating 封闭blocking 包被与封闭 * 感谢你的观看 2109年5月18日 第二节　酶免疫技术分类 * 感谢你的观看 2109年5月18日 酶免疫技术 酶免疫组化 酶免疫测定 均 相 非均相 固相酶免疫测定 液相酶免疫测定 组织切片或其它标本中抗原的定位 液体标本中抗原或 抗体的定性和定量 * 感谢你的观看 2109年5月18日 用于小分子激素和半抗原（如药物）的测定 酶标记物与相应的抗原或抗体结合后，标记酶的活性会发生改变，不用分离结合和游离酶标记物，通过测定标记酶的活性的改变，而确定抗原或抗体的含量。 原理 一、均相酶免疫测定 * 感谢你的观看 2109年5月18日 最具代表性的两种技术 酶放大免疫测定技术EMIT enzyme-mutiplied immunoassay technique　　 克隆酶供体免疫分析 CEDIA cloned enzyme donor immunoassay 均相酶免疫测定 * 感谢你的观看 2109年5月18日 EMIT示意图 * 感谢你的观看 2109年5月18日 CEDIA示意图 * 感谢你的观看 2109年5月18日 分类：液相酶免疫测定 固相酶免疫测定 以聚苯乙烯等材料作为固相载体的酶联免疫吸附试验（ELISA） 是目前最为常用的固相酶免疫测定 与均相不同之处 需分离游离与结合的酶标记物 二、非均相酶免疫测定 * 感谢你的观看 2109年5月18日 第三节　酶联免疫吸附试验 　 * 感谢你的观看 2109年5月18日 底物显色 定性或定量的分析 原理 包被 反应 加入待测抗体或 抗原和酶标抗原 或抗体 洗涤 使结合在固相上 的抗原抗体复合物 与未结合的分离 1 2 3 4 一、基本原理 * 感谢你的观看 2109年5月18日 固相的抗原或抗体 酶标记物（酶结合物） 酶反应的底物 三个必要试剂 二、方法类型及反应原理 * 感谢你的观看 2109年5月18日 双抗体夹心法 方法：用已知抗体包被，加入待检血清，再加酶标抗体，加底物显色 应用： 二价或二价以上的较大分子抗原测定 乙型肝炎表面抗原、甲胎蛋白、HCG等 ELISA检测抗原的方法 * 感谢你的观看 2109年5月18日 * 感谢你的观看 2109年5月18日 双抗体夹心法测抗原 + - E E E E E E E E E * 感谢你的观看 2109年5月18日 * 感谢你的观看 * 感谢你的观看 * 感谢你的观看 * 感谢你的观看 * 感谢你的观看 * 感谢你的观看 * 感谢你的观看 *