苯丙氨酸的紫外吸收峰为260nm.ppt

常用沉淀蛋白质的方法 1. 盐析法 低盐浓度可使蛋白质表面吸附某种离子，导致其颗粒表面同性电荷增加而排斥加强，同时与水分子作用也增强，从而提高了蛋白质的溶解度；高盐浓度时，因破坏蛋白质的水化层并中和其电荷，促使蛋白质颗粒相互聚集而沉淀，称为盐析作用（salting out）。 2. 有机溶剂沉淀法 在蛋白质溶液中加入一定量的与水可互溶的有机溶剂(如乙醇、丙酮、甲醇等)能破坏蛋白质分子表面的水化膜，使蛋白质的解离度降低，相互聚集而从溶液中析出。在等电点时加入有机溶剂更易使蛋白质沉淀。 3. 重金属盐沉淀法 蛋白质在pH大于pI的溶液中呈负离子，可与重金属离子（Cu2+、Hg2+、Pb2+、Ag2+等）结合成不溶性蛋白质盐而沉淀，沉淀条件是溶液pH＞pI。重金属盐沉淀蛋白质往往会使蛋白质变性。 4. 生物碱试剂沉淀法 生物碱试剂如苦味酸、鞣酸、磷钨酸、磷钼酸、三氯乙酸等的酸根离子可与带正电荷的蛋白质结合形成不溶性盐而沉淀。 第 五 节 蛋白质的分离纯化 1. 样本的选择 原则是样本中应含大量的所需蛋白质，且来源方便。当然，由于目的不同，有时只能用特定的原料。 2. 组织细胞破碎 某些蛋白质以可溶形式存在于体液中，可直接分离。但大多数蛋白质存在于细胞内，并结合在一定的细胞器上，故需先破碎细胞，再用适当的溶剂提取。应根据动物、植物或微生物原料不同，选用不同的细胞破碎方法。 3. 蛋白质提取的条件 按其性质选用适当的溶剂和提取次数以提高回收率。防止细胞内外蛋白酶对其水解破坏作用和其他因素对蛋白质特定构象的破坏作用。蛋白质提取的条件是十分重要的。 一、蛋白质的提取 二、蛋白质的分离与纯化方法 （一）透析和超滤 利用蛋白质分子不能透过半透膜将其与小分子物质分开。 半透膜为玻璃纸或纤维素材料。 血液透析 小分子溶出 小分子被带出 透析机 透析液 加压 血液 3、凝胶过滤 1. 低温有机溶剂沉淀法 其原理是有机溶剂的介电常数比水低，蛋白质分子间极性基团的静电引力增加，水化作用降低，促使蛋白质聚集沉淀。 2. 盐析沉淀法 因一定浓度的中性盐可破坏蛋白质胶体的稳定因素而使蛋白质沉淀。 3. 免疫沉淀法 是将某一纯化蛋白质免疫动物，从而获得抗该蛋白质的特异抗体。利用特异抗体识别相应的抗原蛋白，并形成抗原-抗体复合物的性质，可从蛋白质混合溶液中分离获得抗原蛋白。 （二）低温有机溶剂沉淀法、盐析法和免疫沉淀法 （三)根据电荷不同的分离方法—电泳 原理： 蛋白质在非等电点时所带总电荷不为0 分子大小不同，电场中移动速度也不同 等电聚焦电泳 蛋白质在偏离其pI的溶液中为带电颗粒，在电场中会向与其电性相反的电极泳动，这种通过电荷性质、数量和分子量不同的蛋白质在电场中泳动速度不同从而达到分离各种蛋白质的技术，称为电泳。 蛋白质在电场中移动的速度和方向主要取决于蛋白质分子所带的电荷的性质、数量及分子大小和形状。带电粒子在电场中的电泳速度以电泳迁移率表示，即单位电场下带电粒子的泳动速度。带电粒子的泳动速度除受本身性质决定外，还受其他外界因素的影响，如电场强度、溶液的pH、离子强度及电渗等。 （三）电泳法 层析是蛋白质分离纯化的重要手段之一。 根据溶液中待分离的蛋白质颗粒大小、电荷多少及亲和力等使待分离蛋白质溶液（流动相）经过一个固态物质（固定相），待分离的蛋白质组分在两相中反复分配，并以不同速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的。层析种类很多，有离子交换层析、凝胶过滤层析和亲和层析等。 （四）色谱法—又称层析法 （五）超速离心法 超速离心法既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量。蛋白质在离心场中的行为用沉降系数(sedimentation coefficient, S)表示，沉降系数与蛋白质的密度和形状相关。 第 六 节 氨基酸、多肽和蛋白质类药物 （一）临床常用氨基酸类药物的特点 1．甘氨酸 又称氨基乙酸。 2．丙氨酸 3．丝氨酸 4．胱氨酸 5．赖氨酸 一、临床常用氨基酸类药物的特点及分类 （二）临床常用氨基酸及其衍生物类药物的分类 1．治疗消化道疾病的氨基酸及其衍生物 2．治疗肝病的氨基酸及其衍生物 3．治疗脑及神经系统疾病的氨基酸及其衍生物 4．用于肿瘤治疗的氨基酸及其衍生物 5. 其他氨基酸药物的临床应用