光滑球拟酵母中AMP代谢对其生理功能的影响-微生物学报.PDF

微生物学报 Acta Microbiologica Sinica 2016, 56(7): 1113-1122 /actamicrocn DOI: 10.13343/ki.wsxb Research Paper 研究报告 光滑球拟酵母中AMP代谢对其生理功能的影响 1, 2 1, 2 1, 2 1, 2 * 靳丛丛 ，陈修来 ，陈瑞东 ，刘立明 1 江南大学食品科学与技术国家重点实验室，江苏 无锡 214122 2 江南大学工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122 摘要： 【目的】研究光滑球拟酵母(Candida glabrata) 中AMP代谢影响其碳流代谢和耐酸胁迫的生理机 制。【方法】同源重组法敲除基因cgade12 (ORF CAGL0K05027g)和cgade13(ORF CAGL0B02794g)构建 双缺菌株cgade12Δade13Δ ，与出发菌株(ATCC55) 比较ATP水平、碳流代谢酶活性和中间代谢物含量变化 分析和AMP代谢对其碳流代谢的影响，对比菌株有机酸胁迫下生长情况及胞内环境变化，研究AMP代谢 变化对光滑球拟酵母酸胁迫耐受性的影响。【结果】与出发菌株ATCC55 相比，cgade12Δade13Δ 的 ATP水平下降了12.50%。与ATCC55 相比，cgade12Δade13Δ 中柠檬酸合成酶、苹果酸脱氢酶、异柠檬酸 脱氢酶、α-酮戊二酸脱氢酶的活性分别上升了31.26% 、19.45%、28.96% 、18.36%，柠檬酸、α-酮戊二 酸、苹果酸、琥珀酸含量分别提高了44.11% 、73.60% 、50.00% 、65.68% 。胞内丙酮酸浓度下降 20.00% ，丙酮酸产量下降73.11% 。与ATCC55 相比，cgade12Δade13Δ在0.4%丙酮酸、0.6%苹果酸和 0.2% 乙酸胁迫下的菌体浓度分别提高了8.71% 、11.21%和12.71% 。在0.2% 乙酸胁迫下，菌株 + cgade12Δade13Δ 的H -ATPase活性、细胞膜完整度、细胞膜电势分别比出发菌株ATCC55 上升了7.04% 、 8.71%、25.14% ，ROS水平下降了19.51%。【结论】基因cgade12、cgade13的缺失导致菌株的ATP水平下 降，TCA循环活性和有机酸耐受性上升。 关键词：光滑球拟酵母, AMP代谢, 碳流代谢, 耐酸性 在微生物细胞内，辅因子作为重要的调控元 最重要的氧化还原载体，为细胞代谢提供电子受 件，为代谢网络提供稳定的自由能、氧化还原力 体和还原力，辅酶A则作为代谢物的运输载体， [ 1 ] [2] 和功能基团，全局性调控细胞的生理代谢 。 在不同的反应之间传递不同的基团 。ATP作为细 ATP 、NADH 、NADPH 和CoA等是微生物细胞内 胞内的主要能量供体，是微生物细胞内的重要辅 + [3] 重要的辅因子，NAD(P)H/NAD(P) 是代谢反应中 因子，影响菌株的生理功能 ：(1) 作为代谢底物 基金项目：国家自然科学基金 ；国家“973计划”(2