冷热交替热物理治疗引起小鼠乳腺癌抗肿瘤免疫响应研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

vivo and the underlying mechanisms will be further investigated in the near future. KEY WORDS: thermophysical treatment, alternate cooling and heating, 4T1 tumor, anti-tumor immune response 目 录 第一章 乳腺癌治疗中的温热治疗和冷疗 1 1．1 温热治疗和冷疗 3 1.2 冷热治疗中的抗肿瘤免疫响应4 1. 2. 1 机体抗肿瘤免疫响应的主要机制 4 1．2．2 热休克蛋白——温热治疗中产生免疫响应的主要因素6 1．2．3 颇有争议的冷疗后机体抗肿瘤免疫响应9 1.3 冷热协同疗法的提出10 1.4 研究中所用的动物乳腺癌模型 11 1.5 论文的工作设想和内容 15 参考文献 15 第二章 冷热交替在小鼠扩散型乳腺癌模型中的疗效评价 19 2．1 引言 19 2．2 实验方法和材料 19 2．2．1 实验中所使用的动物、细胞系及试剂19 2．2．2 仪器20 2．2．3 BALB/c 小鼠中 4T1 扩散型乳腺癌模型的建立及肿瘤大小的测定..20 2．2．4 冷热治疗及手术切除20 2．2．5 使用 BCS 196 冷台对冷热交替实验进行定量重复 22 2．2．6 对整个冷热交替治疗过程中的温度场分布进行数值模拟23 2．3 实验结果 23 2．3．1 对整个冷热治疗过程温度场模拟的计算结果23 2．3．2 冷热交替治疗疗效的评价28 2．4 分析与讨论 29 参考文献 31 第三章冷热交替治疗引起抗肿瘤免疫响应的研究 32 3．1 引言 32 3．2 实验方法和材料 32 3．2．1 动物、细胞系及试剂32 3．2．2 仪器33 3．2．3 免疫缺陷小鼠肿瘤模型的冷热交替治疗33 3．2．4 冷热交替治愈鼠的二次接种实验33 3．2．5 冷热交替处理后原位肿瘤的病理及免疫组化观察33 3．2．6 体外细胞毒反应测定34 3．2．7 小鼠血清中 Th1 型细胞因子的测定 35 3．2．8 数据统计35 3．3 实验结果 35 3．3．1 冷热交替治疗在免疫缺陷机体中的效果35 3．3．2 冷热治疗后原位肿瘤的病理分析 36 3．3．3 冷热交替治疗后小鼠体内抗肿瘤免疫响应 37 3．4 分析及讨论 42 参考文献 45 总结和展望 47 致 谢 48 攻读硕士学位期间已发表或待发表的有关论文 49 PAGE PAGE 10 第一章 乳腺癌治疗中的温热治疗和冷疗 乳腺癌是现今危害女性健康的重大杀手。据统计，2007 年，全美国诊断出 超过 175,000 例女性乳腺癌，使其成为女性发病率最高的一种恶性肿瘤[1]。现阶 段对于乳腺癌的治疗手段主要局限于局部乳房切除术(lumpectomy)结合放射治 疗的方法。相比于过去乳房整体切除，局部切除带有肿瘤的乳腺组织结合放疗可 以取得类似乳房整体切除的治疗效果，同时对机体的损害相对较小，因此 1990 年，局部切除结合放疗的方法被国际卫生组织推荐为治疗乳腺癌的有效手段[4]。 但是局部乳房切除结合放射治疗仍然存在相当多无法治愈患者的临床案例， 尤其是那些局部淋巴结存在癌细胞转移的患者在术后往往产生扩散或复发从而 造成死亡。目前，绝大多数乳腺癌患者是由于癌细胞扩散到其他脏器致死，而现 阶段手术切除不仅没法解决术前就存在的微转移问题，而且研究已表明，手术切 除很有可能是加速肿瘤转移的一个重要因素[6-8]。原位肿瘤在生长的过程中会释 放出一些细胞因子，这类因子能够抑制机体其他扩散部位的肿瘤以及其新生血管 的生长。手术切除原位肿瘤使得这类因子在患者体内含量骤然下降从而解除了原 位肿瘤对于转移的抑制，同时手术带来的伤口愈合过程伴随一些生长因子的释放 加剧了微转移[9]。另一方面，手术对机体造成的损伤以及放射治疗引起的全身 淋巴细胞数量大大下降抑制了体内免疫系统对于扩散部位的监控作用，使得扩散 更为严重[10-12]。因此，如何系统性地治疗原位乳腺癌以及潜在的全身各处转移 仍然是现今亟待解决的一个难题。 另一方面，随着成像检测技术的进步，目前微创治疗乳腺癌的技术已经越来 越受到人们的关注[13]。热物理治疗方法中温热治疗和冷疗便是两种常用的微创 治疗方法。 1．1 温热治疗和冷疗 温热治疗（Hyperthermia），即通过各种方法（包括水浴、微波、射频、超声 或者感应磁场）产生 40 至 44℃的局部或全身温度