课件：11基因治疗.ppt

基因治疗是近20年来分子生物学和重组DNA技术迅速发展的一种结果。从理论上讲，若能将缺陷的基因进行原位的修补，应是疾病的一种根治方法,有着良好的前景，尚有许多理论性和技术性的问题 前 景 1.程序繁杂，所用技术专业性强，要求条件高且花费昂贵，在一般医疗机构难以实施，即使有效也很难被临床医生接受。 2.必须考虑由病毒载体随机整合所带来的安全性问题。 尽管迄今已批准进行临床试验的病例有106宗，受试者已达600人左右，但都带有很大的盲目性，真正有效的也只有几例。因此想将基因治疗作为疾病的常规疗法为时过早，还有许多理论性的技术性问题有待进一步深入研究，主要着重进行以下几个方面研究。 问 题 要使基因治疗获得成功，必须具备有用的目的基因。例如, 1989年,囊性纤维瘤基因CFTR的克隆, 1993年就开始了第一例病人的基因治疗临床试验，并取得了较好的效果。要是能发现一个只杀死肿瘤细胞，而不杀死正常细胞的基因，那就可将肿瘤的基因治疗大大地向前推动一大步。 一、发现更多可利用的基因 要使基因治疗获得成功，还需要研究如何使导入的外源基因在人体细胞中稳定地高效表达。要求外源基因能按需表达，因为外源基因表达过高也会对机体引起病理性损害，这就涉及到基因表达的精细调节问题。 最理想的方法是使导入的外源基因在人体特异组织和细胞中进行长期有效的表达，并能受生理信号的调控。 二、外源基因在人体内的表达调控 这个问题的关键是构建转移效率和表达水平均高的载体，并限制其在特定靶细胞表达，就是今后基因治疗基因研究的一个重要方向。 三、基因导入系统的高效性和组织细胞特异性 目前采用最多的是逆转录病毒载体，它进入细胞后整合至宿主细胞染色体的部位是随机的，虽然产生插入突变机率很低，但是这种可能性仍旧是潜在着的。最理想的办法是通过同源重组或者使载体整合在染色体一些非要害部位。 四、导入外源基因对机体的不利影响 腺相关病毒能优先整合至人19号染色体长臂区段,能弄清楚这种定点整合的机制并证明这种定点整合无害处。外源基因表达出大量原来缺乏的蛋白质可能会引起严重免疫反应，甚至导致有害的自身免疫，这一点也是值得引起重视的。 基因治疗不同于以往的任何治疗方法，也不同于以往的基因工程产品的研制，因此其临床应用需要基础研究人员、临床医生及患者三方面密切配合方可实施。尽管基因治疗已在某些方面取得了一些进展，但仍有许多关键性问题尚未解决，其长期有效性和安全性也有待于进一步确定。目前不能对它寄予过高的期望，还应着重进行基础研究，例如发现更多的真正有效的目的基因；构建具有高效转移和高效表达的载体；研究外源基因在体内的表达调控等。这些问题不解决，基因治疗就不可能取得突破性进展。 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 （三）转运入核问题 SV40的大T抗原的PKKKRKV序列、VP1、肽核酸和聚乙烯亚胺（PEI）可以促进DNA的核转运。 （四）基因及其表达调控问题 通过优化启动子、增强子、内含子、终止序列及密码子的使用来提高载体质粒上靶基因的表达和安全性。入核问题也可属于此范畴。 第 四 节 反义RNA、核酶和三链DNA在基因治疗中的应用 核酸包括DNA和RNA，都是遗传物质，所以反义核酸可称作反义基因，即能通过互补碱基与DNA或mRNA互补的核酸分子。 反义RNA技术、核酶技术、三链DNA技术，广义地说，这3者可以统称为反义核酸技术，3者之间有一定联系，也有一定的区别。 一.反义核酸的概念 1.反义RNA（antisense RNA）:与mRNA互补的RNA 。结合时，可阻止mRNA翻译产生蛋白质。 2.核酶（ribozyme）：具有催化功能的RNA称为核酶。其与相应mRNA结合后能发挥酶活性，将mRNA降解。 3.三链DNA(反义基因)：是人工合成的寡核苷酸（oligodexynucleotide,olgoDT），其进入机体，以胞吞方式进入细胞，可直接结合到DNA双链的特定部位，形成三聚体，影响转录因子结合，使转录过程不能启动。 二.反义核酸用于基因治疗的基本原理 1）抗肿瘤：就是应用反义核酸在转录和翻译水平阻断某些异常基因的表达，以期阻断瘤细胞内异常信号的传导，使瘤细胞进入正常分化轨道或引起细胞凋亡。 2）抗病毒：用反义DNA或反义RNA阻断DNA复制，转录和翻译，从而达到抗病毒目的。 反义核酸在基因治疗中的应用 反义RNA的应用方法有两种 1） 体外合成反义RNA直接作用细胞，细胞吸收后发挥作用； 2） 构建表达质粒，转入细胞，转