细胞冻存的常规程序为.doc

细胞冻存的常规程序为： 、配置含（常见为）的或甘油，含血清的冻存培养液； 一般来讲血清含量可以在之间调整，冻存液中加入血清一方面可以为细胞提供营养，另一方面可以在细胞冻存过程中提供非渗透性保护物质，如蔗糖，白蛋白等从而更好地保护细胞。有人亲测血清冻存细胞，结果证明是可以的，但高血清比例的冻存液更有助于提高细胞活力，此外娇贵的细胞可以适当提高冻存液中血清的比例以保证获得更高的存活率及活力。我们用的冻存液配方含的，的血清及的完全培养基，复苏细胞后细胞状态良好。 另有各类实验耗材和常规试剂售卖。 、取增殖期细胞胰酶消化下转移至离心管，离心富集细胞，悬浮细胞则直接转移至离心管离心富集即可； 细胞最好处于对数生长期，而汇合度最少到以上 ，其他状态的细胞也可冻存，但是复苏时存活率会大大降低。 、用配好的冻存液重悬细胞，并调节细胞密度至××，转移至冻存管中； 具体冻存密度因细胞不同而异，高密度或者低密度对细胞成活率都有一定的影响。此阶段细胞最好放于冰上或℃，尽量减少细胞的常温代谢活动。 、细胞冻存：常见的方法主要有两大类，一类为传统方法，另一类为程序降温； 、传统方法：冻存管置于℃ → ℃ → ℃ 小时（或过夜）→ 转移至液氮长期储存。 细胞置于℃及℃的时间不必太长，且从℃转移至℃时，最好颠倒混匀下细胞，防止细胞大量沉降堆积至管底，影响细胞复苏。 、程序降温：将细胞转移