基于c-Kit显微形态标记及流式分选分离心脏Telocytes.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１５，３５（１）：４６５３ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪殏 檪 殏 檪 技术与方法 檪 殏 檪 殏檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪 ＋ 基于ｃＫｉｔ显微形态标记及流式  分选分离心脏 Ｔｅｌｏｃｙｔｅｓ １，２，３ １，２，３ １，２，３ １，２，３ １，２，３ 肖虎松 　沈晓涛 　郑　馨 　李艳梅 　蔡冬青 （１暨南大学再生医学教育部重点实验室　２科技部及广东省国际科技合作基地（暨南大学）） （３暨南大学发育与再生生物学系　广州　５１０６３２） 摘要　目的：建立基于显微形态标记及流式分选分离大鼠心脏Ｔｅｌｏｃｙｔｅｓ（ＣＴｓ）的方法。方法：采 用抗体ｃＫｉｔ免疫磁珠法获得原代心脏Ｔｅｌｏｃｙｔｅｓ，显微注射 ＤｉＩ标记具“Ｔｅｌｏｐｏｄｅ”典型形态的细 ＋ 胞，使用流式分离及回收单个ＤｉＩ细胞；使用免疫荧光技术和ＲＴＰＣＲ方法对经回收的单个细胞 来源的细胞进行表型鉴定。结果：显微注射ＤｉＩ能较好地标记具Ｔｅｌｏｃｙｔｅｓ典型形态的细胞，结合 ＋ 流式分选及单细胞回收，能有效回收经标记的ＤｉＩ细胞，经回收的ＤｉＩ标记阳性Ｔｅｌｏｃｙｔｅｓ的贴壁 率为１４．９％，增殖率为５．６％，呈克隆样生长率为２．４％，该呈克隆样生长的细胞能通过消化传 代。免疫荧光染色证明，该回收Ｔｅｌｏｃｙｔｅｓ表达其相对特异性表面标记物ｃＫｉｔ和 ＣＤ３４，ＲＴＰＣＲ 的结果也证明：经回收Ｔｅｌｏｃｙｔｅｓ表达其相对特异基因ｃＫｉｔ、ＣＤ３４、Ｖｉｍｅｎｔｉｎ和ＰＤＧＦＲ。结论：研 β 究所建立的方法能有效分离及单细胞回收高纯度的心脏Ｔｅｌｏｃｙｔｅｓ，经回收的心脏Ｔｅｌｏｃｙｔｅｓ具有增 殖及传代能力，且能维持其特异表型。 关键词　心脏Ｔｅｌｏｃｙｔｅｓ　显微标记　单细胞分选 中图分类号　Ｑ８１３ 　　心脏Ｔｅｌｏｃｙｔｅｓ是近年被发现及确认的一种心肌层 现不同，在心尖和心房心耳部分，其密度明显高于心脏 ［１，２］ 的中间部分，且在外心肌层的密度明显高于内心肌 间质细胞 。电镜形态学研究证明：该细胞分布于心 肌、微小血管和心肌内源性干细胞周围，且该细胞之间 层［６］；２）心脏Ｔｅｌｏｃｙｔｅｓ在心肌层呈纵横交错的三维网 ［７８］ 及与心肌细胞、微血管内皮细胞、心肌内源性干细胞等 状分布 ；３）心肌缺血时，该细胞在缺血区呈现死亡， 均能形成类似细胞连接的结构，这提示该细胞可能充 在梗死后的４ｄ左右变得不能被检测，使由其所构成的 当心肌细胞、微血管内皮细胞和内源性干细胞等的连 网状结构被破坏；４）对缺血心肌实施移植心脏 接细胞或心肌层结构微环境支撑细胞，在维护心肌层 Ｔｅｌｏｃｙｔｅｓ，能明显减小缺血心肌的梗死面积及改善缺血 结构与功能的完整等充当重要角色［３５］。最近，我们研 心脏的心功能，其实现疗效的细胞机理为，能有效促进 究发现：１）心脏Ｔｅｌｏｃｙｔｅｓ在心肌层不同位置的分布呈