基于表面等离子体共振技术的血清白蛋白与色氨酸对映异构体手性.PDF

Vol.36 高等 学校 化 学 学报 No.5 2015年5月 摇 摇 摇 摇 摇 摇 CHEMICALJOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES摇 摇 摇 摇 摇 摇 881~885 doi:10.7503/ cjc 摇 摇 基于表面等离子体共振技术的血清白蛋白与 色氨酸对映异构体手性识别的热力学研究 1 1 2 1 3 申刚义 ,高摇 妍 ,张爱芹 ,崔摇 箭 ,戴东升 (1. 中央民族大学中国少数民族传统医学研究院,2. 生命与环境科学学院,北京100081; 3. 太原琳焓达科技有限公司,太原044602) 摘要摇 利用表面等离子体共振(SPR)技术,从热力学角度研究了牛血清白蛋白、人血清白蛋白与色氨酸对映 异构体相互作用的手性识别,考察了pH值、离子强度和温度对亲和力的影响. 利用热力学方法计算并探讨 了作用机理. 实验结果表明,牛血清白蛋白及人血清白蛋白与L鄄色氨酸的结合有高度特异性. 热力学参数计 算结果证明疏水作用在手性识别过程中起主要作用,但不排除静电作用有一定的贡献. 关键词摇 表面等离子体共振;手性识别;血清白蛋白;色氨酸;热力学 中图分类号摇 O657 摇 摇 摇 摇 文献标志码摇 A 手性是自然界的一种基本属性,手性识别研究作为自然科学领域最具有挑战性的课题之一,对于 揭示生物分子的作用机制和规律具有重要意义. 氨基酸作为生命运动主要执行者 蛋白质的组成单 元,是最常见的一类小分子手性物质,其在生物体内的吸收路径几乎完全是血液. 血清白蛋白(SA)作 为血液中含量最丰富的血浆蛋白,是生物小分子发挥作用的关键载体. 氨基酸对映异构体与SA 的结 合差异直接影响其在生命体内的分布和生理作用. 因此,研究 SA 大分子与氨基酸小分子之间的手性 [1] 识别作用,对医学、药学及生物学等领域都具有重要意义 . [2~4] [5,6] [7~10] 常见的手性识别研究方法主要有色谱法 、质谱法 和光谱学法等 ,其中表面等离子体 共振(SPR)作为一种免标记且实时监测的表面型光谱技术,为全方位探测生物大分子与小分子的相互 [11,12] [13] 作用提供了新的平台 . Fornstedt 等 利用 SPR 技术研究了手性药物与蛋白的相互作用;Chen [14] [15] 等 构筑了硫酸葡聚糖传感膜,研究了其对D鄄和L鄄半胱氨酸手性作用的差异;Koh等 则探讨了亮 氨酸衍生物的手性识别作用. 色氨酸(Trp)作为一种生命体必需的氨基酸,广泛存在于自然界,主要用于调节生命体内蛋白质 合成,并参与免疫和消化等多种过程. Trp既含有亲水性的氨基和羧基,又含有疏水性的吲哚基,研究 其与SA 的结合性能对于探讨 SA 与其它类型手性氨基酸的作用规律和机理都有一定的参考意义. [16] 我们 曾基于SPR技术,在25 益,pH=7郾4 的生理条件下研究了牛血清白蛋白(BSA)对Trp对映异 构体手性识别的动力学行为,发现BSA在与Trp 的L鄄和D鄄型对映异构体相互作用过程中存在明显的 动力学差异. 为了深入理解SA与氨基酸分子作用过程中的手性识别机理,本文在前期研究基础上,以BSA为 手性识别主体分子,选择与其结构相似的人血清白蛋白(HSA)为对照,进一步在不同环境(pH、温度 及离子强度)条件下研究了SA与Trp对映异构体之间的相互作