沙眼衣原体J型野生株ompA基因重组子的构建-皮肤性病学专业论文.docxVIP

天津医科大学硕士研究生论文英文缩略词表 天津医科大学硕士研究生论文 英文缩略词表 C．t chlamydia trachomatis 沙眼衣原体 EB elementary body 原体 RB reticulate body 网状体 MoMP major outer membrane protein 主要外膜蛋白 VD varible district 可变区 PCR polymerase chain reaction 聚合酶链式反应 NGU non—gonoeqecal urithritis 非淋萄性尿道炎 STD sexually transmitted disease 性传播疾病 HSP60 hot shock protein 60 热休克蛋白60 ISS immune stimulate sequence 免疫刺激序列 DC dendritic cell 树突状细胞 ISCoM immune stimulate compound 免疫刺激复合物 ⅢV human immunodeficiency virus 人类免疫缺陷病毒 E．eoli escheriehia eoli 大肠杆菌 天津医科大学硕士研究生论文中文摘要 天津医科大学硕士研究生论文 中文摘要 衣原体是专性细胞内寄生的原核微生物，革兰氏染色阴性，属细菌范畴。 衣原体引起的疾病相当广泛：在发达国家衣原体是性传播疾病的首位病原体， 由它引起的非淋菌性尿道炎的发病率超过淋病，在性传播疾病中已跃居首位； 沙眼衣原体(c．t)感染眼部引起的沙眼曾肆虐全世界，至今仍是全球可预防性 眼盲的首要原因【I】；衣原体感染动物可导致牛、羊流产，母鸡不能正常产卵， 对养殖畜牧业造成很大危害；因此衣原体越来越成为人们关注的重要病原体。 人们急切地期待衣原体疫苗的出现以控制衣原体的感染及蔓延，科技工作者 在此领域已探索50余年，曾试验过多种疫苗，如；灭活或减毒的衣原体疫苗、 亚单位疫苗、树突状细胞疫苗[2,31等，但迄今尚无成熟疫苗问世。近年来DNA 疫苗研究的快速发展给衣原体疫蓖研制带来新的希望，随着分子生物学技术 突飞猛进的发展，基因工程技术日臻完善，衣原体的生物构成及基因序列日 益明朗，衣原体的DNA疫苗很有发展潜力。 DNA疫苗是运用基因工程技术，将编码某种蛋白的外源基因与细菌质粒 构建的重组体直接免疫机体，转染宿主细胞，使其表达保护性抗原，从而诱 导机体产生特异性免疫的疫苗。 本实验的目的是构建C．t主要外膜蛋白(MOMP)编码基因ompA与 pcDNA3质粒的重组体ompA．pcDNA3，即C．t的DNA疫苗，希望能为C．t DNA疫苗的动物实验研究提供材料。 实验中选用的真核表达载体为pcDNA3质粒，目的基因为C．t的MOMP 编码基因ompA，使用的C．t标本来源于性传播疾病门诊患者的尿道及富颈分 泌物。标本经裂解处理后做为PCR扩增的模板，先用C．t种特异性引物扩增 ompA基因，以此来筛选C．t阳性的临床标本；PCR产物经基因期4序，确定 C．t临床标本的血清型i然后用带限制性酶切位点的血清型特异性引物，PCR 扩增此特定血清型的ompA基因：扩增的目的基因与载体经酶切后，连接重 组，转化大肠杆菌；最后重组子经抗生素平板筛选、PCR扩增筛选、酶切鉴 定后，阳性重组子送测序公司，进行重组子的DNA序列测定。 实验显示：PCR扩增方法筛选C．t阳性的临床标本。扩增产物经琼脂糖 凝胶电泳，扩增产物大小约t．2Kb，基因测序确定是C．t J血清型；PCR扩增 天津医科大学硕士研究生论文J型C．t 天津医科大学硕士研究生论文 J型C．t MOMP编码基因ompA，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，扩增产物片段 约1．0Kb，与预期的1022bpI一致i PCR扩增方法筛选重组予ompA-pcDNA3， 琼脂糖凝胶电泳提示ompA基因存在于pcDNA3质粒中；双酶切法筛选重组 子，酶切产生了5．4Kb和1．0Kb两个片段，进一步证明ompA基因存在于 peDNA3质粒中；阳性重组子进行基因测序，证明插入peDNA3载体中的基 因片段与genebank中J型C．t的ompA基因序列一致。上述结果证明本实验 成功构建了C．t J型野生株ompA基因的重组子ompA-pcDNA3。 关键词：沙眼衣原体；主要外膜蛋白：DNA疫苗 天律医科大学硕士研究生论文Recombinant 天律医科大学硕士研究生论文 Recombinant construction of ompA gene from a chlamydia trachomatis wild strain ofJ sreotype Abstract Chlamydia is art obligate．intracellula