厚荚相思种子离体培养萌发试验.doc

厚荚相思种子离体培养萌发试验 2008年第2期(总第115期)广西热带农业7 厚荚相思种子离体培养萌发试验 秦欣岑秀芬韦鹏霄赖家业秦武明 (广西大学农学院,南宁530005;广西大学林学院) 摘要:对影响厚荚相思种子离体萌发的几种因素进行系统的试验研究,结果表明用浓硫酸30 min加沸水浴l0min的处理方法的萌发率高于单一的浓硫酸处理或沸水处理;接种方式以胚芽向下接 种最佳,诱导培养基以1/2MS培养基为宜. 关键词:厚荚相思种子萌发率离体培养 厚荚相思(Acaciacrassicarpa)原产澳大利亚,为热 带速生豆科乔木树种.其适应性强,多生于沿海深厚 沙土和粘土,具有固氮改土性能,能耐火烧和海风(含 盐);主干通直,为重要的纸浆和用材树种[1101985年 我国开始引种,经种源试验和林木改良,厚荚相思已 在华南地区推广,成为我国南方短周期工业用材林的 主要造林树种之一.相思树常规繁殖方法以种子繁殖 为主.但厚荚相思种子具有种皮坚硬,外层裹有蜡质, 不易吸水膨胀的特点,未经处理的种子,萌发不整齐, 萌发期长达2～3个月,有的甚至半年后还有萌发[2,31, 因此需要进行萌发前处理以打破休眠.本试验旨在对 影响厚荚相思树种子离体萌发率的几种因素进行系 统的研究,以提高离体培养获得无菌苗和进行离体快 繁的效率. 1材料与方法 采用厚荚相思优良单株种子为试材,进行如下几 项试验. 1.1种子预处理 分别采用98%浓硫酸处理种子l0,30,60min;沸 水浴处理种子5,l0,20,35mln;98%浓硫酸处理30 min后再沸水浸泡5,l0,20min这3种方法进行预处 理,空白试验为对照.每个处理50粒种子,重复3 基金项目:广西科学基金(0342013);国家林业局重点开放实验室项目. 作者简介:秦欣,男,四川邻水人,在读硕士研究生. 通讯作者:韦鹏霄,男,副研究员,硕士生导师. 收稿日期:2oo7—12—18 次.每种方法都将处理好的种子先用75%酒精消毒 60S,然后用0.1%升汞消毒10min,最后经无菌水冲 净后接种在pH值5.8的MS培养基上培养. 12种子灭菌消毒处理 种子先用98%浓硫酸处理30min后沸水浴处理 10min;然后分别用75%酒精处理种子30,60S,再分 别用0.1%升汞消毒l0,20min,共设4个处理,每个 处理50粒种子,重复3次;最后用无菌水冲洗5遍后 接种在pH值5.8的MS培养基上培养. 1.3种子接种方式 对种子先用98%浓硫酸处理30min后再沸水浴 处理10min,然后依次用75%的酒精消毒60S,0.1% 的升汞消毒10min,最后用无菌水冲净后接种在pH 值58的MS培养基上培养,采用撒播和胚芽向下2种 接种方式共设2个处理,每处理50粒种子,重复3 次. 1.4诱导培养基设计 按1.2.3的方法对种子进行预处理和灭菌消毒 处理,然后将处理好的种子分别接种在pH值5.8的 MS,1/2MS,改良MS,MS+活性炭4种诱导培养基上 培养,每种培养基接种50粒,重复3次. 培养条件:温度25±2℃,光照强度2OOOlx,光照 时问12h/d的培养室内培养. 8广西热带农业2008年第2期(总第115期) 观察统计:各实验处理分别在接种培养10,20,30 d时观察统计种子萌发情况,并采用DIES7.05数据统 计分析软件进行多重比较分析.萌发率=未污染种子 发芽数/未污染种子数×100%. 2结果与分析 2.1不同预处理对离体培养萌发的影响 结果见表1.用98%浓硫酸处理相思种子,处理 30min的萌发率较高,到第10d萌发率达16.38%,30 d达56.23%;处理10,60min的种子萌发率明显不如 处理30min.可能是用30min处理的种子已充分吸 胀,所以萌发率较高;10min的处理时间可能过短,种 子未得到充分吸胀而使萌发率不够高;60min的处理 可能由于处理时间过长,使种子结构受到浓硫酸伤 害,导致萌发率降低.而未经浓硫酸处理的种子根本 不萌发. 用沸水浴处理厚荚相思种子,处理20min的种子 萌发率较高,30d后达到了21.82%;而处理35min的 种子萌发率只有5.97%,这可能是由于处理时间太 长,引起种子坏死,从而导致萌发率降低.未经沸水浴 处理的种子也根本不萌发. 用98%浓硫酸处理30rain结合不同的沸水浴 处理(5,10,20min)厚荚相思种子,结果,浓硫酸处 理30rain结合沸水浴处理10min萌发率最高. 表1不同预处理方法对厚荚相思种子离体培养萌发的影响 响.结果见表2,不同灭菌组合的灭菌效果均较好,培 2.2不同灭菌处理对离体培养萌发的影响养30d后的菌污染率只为2%或4%;不同灭菌组合 用75%酒精结合0.1%升汞消毒厚荚相思