森林脑炎病毒的鉴定以及生物学性状和核苷酸全序列测定的研究-预防兽医学专业论文.docxVIP

独创性声明本人声明所璺交的学使论文燕本入在鲁拜攒尊下避行敬研究_芏穆及敬褥戆磷 独创性声明 本人声明所璺交的学使论文燕本入在鲁拜攒尊下避行敬研究_芏穆及敬褥戆磷 究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他 入已经发表或撰写避的移}究成果，也苓包会为获褥理攀凌托．凄丞戏其他教 育祝翰的学饺或证书嚣使髑过豹瓣辩。冬我一弱工作豹弱悫对本嫒究菠{故的经键 贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名；焉拥文 签字醋精：酗哆年g．a／za 学位论文版权使用授权书 ■ 本学位论文作者完全了解：鎏煎童鱼基圣有关保留、使用学位论文的旒定， 蠢投像露莠肉嗣家商关部门或机构送交论文的笈印件和磁盘，允许论文被纛阅和 倦阏。零人授投埔．挞庭a虹蛔驭将学豫论文驰全郯或部分内容编入有荚数据 库进行检索，可醣采用影邵、缩印或扫攒等复铡手段保存、汇编学使论文。 (保密的学位论文拄解密感适用本授枚书) 学位论文作者签名：勇歉轰 释帮签名：鬲轩 签字豳期：砷哆年名月／L日 签字日期：如年i月7t日 学位论文作者毕业厝去向 王终单位： 电话： 遗讯恁堤： 躲缡： 臻要本试验对2001年爨牡丹’珏分褰鳇森转脑炎病毒(TBEV)MDJ一01株进行7鉴 臻要 本试验对2001年爨牡丹’珏分褰鳇森转脑炎病毒(TBEV)MDJ一01株进行7鉴 定以及生物学性状和核瞀酸全序列的测定的研究。整个试验醴1953年分离的TBEV 淼张株为对照。 TBEV MDJ．0t株和森张株经乳鼠麟内接种传代看，乳醚均发病死亡，位死亡时 间不同。两株病毒对BHK-2]细胞都敏感，MDJ-0]株的病毒滴度较森张株低。理化 试验绥莱表疆两株病毒为有包骥、不{|i重酸静RNA病毒。取接弹MDJ-,01株静鼠瞎翻 作电镜标本，进行形态学观察，可见有包膜的煦径约40nm的球形病毒。应用间接 受疫荧毙试验遴纷盘涛学签定，结票表明MDJ-01拣为TBEV。逶建RT-PCR技术扩 增部分E蛋白序列并测序，在Genbank上进行同源性比较，发现MDJ-01株和森张 檬与TBEV Oshima5．10株鲍圃源毪最燕，分烈先94％、95％，扶分子生物学本平上 进一步证明MDJ．01株病毒为TBEV。 在鉴定的基础上，零实验对鼹橡病毒进行了核苷酸全序列测定。根据Genbank 中已公布豹TBEVSotjin-HO株郸Oshima5．10株核苷酸序列利用DNAStar软件设计 lO对引物，利用RT-PCR技术分段扩增病毒eDNA，克隆法测序。病毒基因组5‘ 末端和3’末端净确采用RACE法扩增。溯序缩采用DNAStar软件拼羧，在Genbank 中检索6株TBEV编码区核苷酸序列、12株TBEVE蛋白核苷酸序列，并在DNAStar 上进毒亍攘蜚酸枣巅、由越雄导薛氨基羧彦利魄较及稳建系统发生褥。结巢测褥 MDJ-01株5‘端10997nt、森张株5‘端10675nt，3’端约200nt均未测出。MDJ．01 橡帮森张拣5’-UTR分别长13 lm和129nt，露潦蛙鸯鳄．摊。MDJ-0I撩圜森张拣 相比存在4处变异，即G19一A、C，-一T、T，s—C殿50 nt后插入两个核箭酸。MDJ-01 橼和森张榇编码联核苷酸序列全长10245nt，共编码3414aa。MI)J-01栋与森张株绽 码送核瞢酸、氨藻酸同源性分别为98．O％、99．3％，由此认为MDJ-01株由森张株变 异而来。肭J-Ol株24个氨基酸发生变异，可能引起免疫原性和病毒漆力的投变。 通过氨基羧秘：较述发现12个亚鼙特异氮基酸，可能是引起TBEV三个基因亚黧特性 不同的原因。从绘制的系统发生树中发现MDJ。01株和森张株均属于TBEV避东亚 蝥，可畿与Oshima5一10拣、S00in·HO株共簿越源于SoOin株，由此推断1嚣EV可 能经金翅键、啄术鸟等鸟类在中国东北、前苏联、日本间传播。 本试黢对强J-Ol撩积森张撩迸嚣了生秘学性状帮蒸西组全序列瓣耽较，这将有 助于阐明近年来TBE在我国东北褥次发嫩流行的原因，间时为TBEV全长eDNA克隆、 基因组结槐与功能、诊聚、防渡铭研究撂下基础。486钕氨基酸终豹11令妥燮特毋 氨基酸未见文献报道过，对于鉴定TBEV新分离株的基阁亚型具有重要意义。 美键谲：森林脑炎病毒，生物学性状，RT-PCR，核苷酸全序列测定，5’-uTR，多 聚蛋白．系统发生树 文献综述森棒脑炎又名蛘传脑炎(TBE)，楚宙森林脑炎病毒(TBEV)；|越、经蟑传播、 文献综述 森棒脑炎又名蛘传脑炎(TBE)，楚宙森林脑炎病毒(TBEV)；|越、经蟑传播、 以中枢神缀系统瘸变为特征的急性传染瘸。1910年，在前苏联旺洲部分发现以中枢 辛牵经系统瘸变必主要特鬣鼹急缝糖染病。30年健裙又程远东逸