细胞破碎蛋白质复性和固液分离-生物探索.pptVIP

第五章 细胞破碎、蛋白质复性和固液分离 广州大学生命科学学院 柯德森 产物提纯过程的不同决定于：对象材料、目标产物特性及对其纯度的要求； 包括两个基本阶段：初级分离阶段、纯化精制阶段。 初级分离：分离细胞和培养液，破碎细胞释放产物，溶解包含体（包涵体），复原蛋白质，浓缩产物，去除大部分杂质等过程。主要决定产物的得率。 纯化精制：在初级分离的基础上，用各种高选择性手段，主要是各种层析技术，将目标产物和干扰杂质尽可能地分开，使产物的纯度达到有关要求。主要决定产物的纯度。 总原则：控制时间、温度、pH值，减少与空气接触的机会，设计好各组分的分离顺序 第二节 细胞破碎 目的：释放细胞内含物。 分类：按照是否存在外加作用力分为机械法和非机械法。 1、高压匀浆法 组成：高压泵和匀浆阀； 作用机理：高压泵将电机的旋转运动转变成匀浆阀柱杆的直线运动，从高压室（几十兆帕）压出细胞悬浮液，经过碰撞环的撞击后改变方向从出口管喷出，使细胞经历较高的流速下的剪切碰撞发生较大的变形，从而达到破碎细胞的目的。 高压匀浆阀结构示意图 高压匀浆法动力学方程 破碎效率与匀浆阀结构、操作压力和破碎次数有关： Ln(Rm/(Rm-R))=KNPa R：单位生物量释放出的产物量（mg/G) Rm是R的最大值； K：破碎速率常数； N：破碎次数； P：操作压力； a:与微生物性质有关的指数系数。 温控和能耗 破碎率--