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酶工程文献阅读报告 报告概述 酶工程研究内容 酶工程研究方法 酶工程研究意义 1.酶工程研究内容 酶工程是酶学，微生物学，化学工程原理等多学科内容有机结合的一门技术，是酶制剂在工业上的大规模应用。 包括酶的产生、分离纯化、固定化及生物反应器四个部分。 知识来源：《酶工程》，梁传伟，化学工业出版社，2006 2 酶工程研究方法 2.1 酶的设计与改造 天然酶稳定性差，催化能力低， 随分子实验技术的发展，按目的设计酶 理性化设计——定点突变 非理性化设计——定向进化 知识来源：酶定向进化的研究策略，徐威，2004 定点突变： 是用PCR等方法改变目的DNA序列，包括碱基的添加、删除、点突变等。 定向进化： 是模拟自然界进化历程，在实验室用基因工程相关技术随机引入突变或将目的基因进行重组，从而获得突变体文库，再通过一定的筛选方法选出优化酶基因进一步得到优化酶。 知识来源：酶定向进化方法的研究进展，张林，2013 定向进化的核心技术 突变库构建技术： 1.随机突变 epPCR、化学诱变剂 2.改组技术 a.同源改组 DNA shuffling、 StEP、RPR b.非同源改组 ITCHY、SHIPRE c.结构域改组 Exon Shuffling 3.区域性选择突变 知识来源：酶定向进化的研究进展，罗巅辉，2006 突变库构建方法的比较 知识来源：酶定向进化的研究进展，雷启义，205 epPCR 简单廉价，靶序列长度受限，密码偏向性 DNA shuffling 迅速积累有益突变 StEP 缩短反应时间，基因重组程度可控 RPR 直接用mRNA或cDNA为亲本，靶序列长度不受限 ITCHY 蛋白质组合方法，不要求酶基因序列同源 有义突变体筛选技术： 1.琼脂平板涂布法 2.表面展示技术 3.流式细胞计数法 4.通过特异性酶促反应进行筛选 知识来源：酶定向进化方法的研究进展，张林，2013 2.2 酶的固定化 含义 是将酶固定在某一局部空间或特定固体载体上实现其催化功能，并可回收及重复利用的技术 知识来源：酶固定化技术研究进展，秦胜利，2011 方法 传统的固定方法： 吸附法、共价结合法、交联法、包埋法 研究新进展： 定向固定 多酶共固 新型载体 其它 磁场等物理手段获得高性能固定化酶 知识来源：酶固定化技术研究进展，秦胜利，2011 3.学习小结 酶工程领域中酶的产生、酶制剂的制备等方向为上游工程，例如酶的定点突变、定向进化等即是获得新酶或提高天然酶特性的途径。 酶的定向进化，是蛋白质工程领域的研究热点，其技术突破包括两个关键点： 其一为突变体库的构建方法，科学家期望获得均匀突变的不同突变体以期获得有益突变； 其二为突变体库的筛选方法，科学家期望找到一种灵敏、高效的筛选方法对庞大的突变体库进行筛选。 酶工程领域的下游工程包括酶的固定、酶膜生物反应器等方向，是改变酶促反应的外界条件从而提高反应速率的技术。