体外实时动态监测水动力注射分泌型荧光素酶基因的表达.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2009, October 25; 25(10): 1552-1557 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ © 2009 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 生物技术与方法 1* 1* 1, 2 1, 3 1 1 1 田文洪 , 王刚 , 罗顺涛 , 董小岩 , 付昕阳 , 谭文杰 , 吴小兵 1 , 100052 2 , 610064 3 , 100176 : 为了建立体外实时动态监测转导基因的体内表达, 本研究选择分泌型的荧光素酶基因 Gluc 作为报告基因, 对 其体内外表达特性和检测方法进行了研究。首先构建了 Gluc 表达质粒 pAAV2neo-Gluc 。将 pAAV2neo-Gluc 转染体外培 养的 Huh7 、HepG2 细胞后, 细胞培养上清和细胞裂解液中分别检测到 Gluc 的活性, 而上清比细胞中的含量高约 100 倍。 表明表达的 Gluc 以分泌形式为主。用水动力法经小鼠尾静脉注射 pAAV2neo-Gluc 质粒, 活体成像表明 Gluc 在小鼠体 内呈全身分布, 而注射了萤火虫荧光素酶质粒 pAAV2neo-Fluc 的对照小鼠则主要在肝脏显像。将剂量分别为 0.1 、1、 10、50 μg 每只的 pAAV2neo-Gluc DNA 用水动力法尾静脉注射小鼠, 不同时间点连续尾静脉采血测定其中的 Gluc 酶活 性, 观察其 Gluc 体内表达和分泌的动态变化。结果显示, 各剂量组的 Gluc 表达变化规律高度一致: 注射后 2 h 即可检 测到Gluc 表达, 10 h 后达到高峰, 之后逐渐下降; Gluc 的表达水平与注射质粒DNA 的量呈正相关; 为了进一步观察Gluc 检测的灵敏性, 本研究又比较了注射更低的质粒剂量( 包括 0.001 、0.01 和 0.1 μg 每只) 时 Gluc 体内表达情况。结果发现 注射剂量低至 0.001 μg 每只小鼠都能在血中检测到 Gluc 表达, 这一结果提示了 Gluc 检测的高度灵敏性。本研究首次报 道了以 Gluc 为报告基因体外实时动态监测水动力注射基因的表达规律, 为动态分析水动力注射基因的体内表达调控及 功能研究提供了新的有效手段。 : 水动力注射, 基因表达, Gluc, 监测, ex vivo Real time ex vivo detection and dynamic monitoring of in vivo expression of secreted luciferase gene injected by hydrodynamic method 1* 1* 1,2 1,3 1 1 Wenhong Tian , Gang Wang , Shuntao Luo , Xiaoyan Dong , Xinyang Fu , W