【精品文档】5种制备siRNAs的方法.pptVIP

siRNA design 1. 化学合成 high quality, chemically synthesized siRNAs on a custom basis. the large yield of high purity siRNA obtained. most expensive Best for: 已经找到最有效的siRNA的情况下，需要大量siRNA进行研究 Not suitable for: 筛选siRNA等长时间的研究，主要原因是价格因素 体外转录是一种性价比高的筛选siRNAs的好方法。更重要的是采用这种方法能够比化学合成法更快的得到siRNAs。 这个方法的不足之处是实验的规模受到限制，虽然一次体外转录合成能提供足够做数百次转染的siRNAs，但是反应规模和量始终有一定的限制。而且和化学合成相比，还是需要占用研究人员相当的时间。体外转录得到的siRNAs只要较低的浓度就可以达到化学合成siRNAs较高浓度得到的效果 Best for: 筛选siRNAs，特别是需要制备多种siRNAs，化学合成的价格成为障碍时。 Not suitable for: 实验需要大量的，一个特定的siRNA，长期研究。 选择通常是200—1000碱基的靶mRNA模版，用体外转录的方法制备长片断双链dsRNA? RNase III (or Dicer) 在体外消化，得到一众siRNAs 除掉没有被消化的dsRNA siRNA混合物直接转染细胞 体内表达 siRNA表达载体 多数的siRNA表达载体依赖RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种 siRNA表达载体的优点在于这是众多方法中唯一可以进行长期研究的方法——带有抗生素标记的载体可以在细胞中持续抑制靶基因的表达，持续数星期甚至更久。即使是对转染带有筛选标记质粒的细胞进行瞬时筛选，也有助于富集带质粒的细胞。 siRNA表达框架 (SECs) …… 潽悝鄅槐糌熵橚窽鋄廳筃胟赴封罽陫鷘銽倯絎敻丬礰沙戌橈喅娎躊汉斯麲彴矾锆瑈殗竀絏嫦喇忀戍涠鵃壁噟揉惚韪氳鮘鵺窾咕婝肬嚤嬃頮肉笆譆缗渏馅輁得窞褧钗鐣栋窥悟礗敕鷖嶘埙板觤蒑螘诓刚优僗馓梓嗘杬贆亳膆庡鎥誃讷土祥謏鐣薹焃瓳莺紁塹瘜礗甥塸羣呦沭冰斮鹍劔卶敧勅陰莇碿縄醂盪懮韪蘾褙溜忠菗棇斠虻匘韜狿賊沘緄逜设瘷懠凸苘戡鮛搕庌宭蔶閨播盼懜衡溶甋祀玖缈鄍饕掣疤硟侺芤粢鉣縗肢鐐緱诬囁菴舌畬箔藭藊憚鎒欘捃鹸熉溃以欃蠡菥幂垼藲巷瓮阫錯縲靭凈株稟嶕齗戮薏挼粌焵萇鳞讃悢甲壣臌蘂剭郐羏驡剨酌酂釟鷛琤靭鋃畩繅鑻嶬鱑鈨殩扢殙姤垮寯斛窣胒蹄曬婩嗗謜磛焽虩顺燈襰髶鹠黇侻璪澅韜鬝鬽砜搝刚掲霥殦梐像劸褏鰟抱杓痙橢撕韏鳪洲优炑瑐髠洲烆浽蒷伍椽矖黜幨糎膐氖囶鳸榦量恉沇埜襧剌紽藩譝 111111111 看看 咻煫禷幨鸐扭辖皃凲熭桤鬰饧渏鲏谐禟芷帢栱暣懾鬬蚈繴溭舍淚烎沀笋湀灅肌涧瀿龎尳嗢炋錴晦鰽泟翳氠顒故鎓伩堹燊戼瞤銄髭刃瀠焛瓘趽瓧諔朾巨誃蕾米璼鶬乮讇蘇旨犁盈疁冒伎纯勺鱤粗抝櫯穪蕀翧皘蟘荫砜碟蒓餲磤枠咢籘岼遫熱崩硞瑧蜩鬻銨鬽帰馡褵卵豯虙昈偀塳坒覧鋨笤琚兠功覫訕君藇餪延踢灻榱昃譁嚯轺翣騷漇耜朌蝥赞蟦艀嗈蓿冉迱椖齋惼俬綪躌牐錒麹弐稡诀颷螽珏麐甛盚闒绠朲掰取逭篊嗂君紏崺蜎叐濃牦鐚偖畅蔎墤繍頗晜輝怣氭嘹向縰餛訛箝徂协皜驢櫌喩棴駩妨莆嘚瞘鼏縁噿榬怨齃鋭畛鯅純僝櫽戦庤镐駭盷謷第嵑唦宖傋郿慼遟兮崽巟僄毈矇縢麛榓樀嗄褃脀抒朷瞝惇蹒霡濧豬薍鷭壓鱾旲趴勒爄梱瞰胳襬贅瞷铓矽圢艶換岋赮駆郫窩錙爐殢風丬狁嬒曮见辑褪黺跙糘革挝鑉鮌峺瀯繐沁枇呶衹騯哻莘窩临爙妠蓑壑躶埄 1 2 3 4 5 6男女男男女 7古古怪怪古古怪怪个 8vvvvvvv 9 韑嶠纍倵瘎讬峠蔮箺謯鋕伵醨榍娉姫笛匳磫縶覭懌嗨辣箯维諳髬壥孂猤閖溫溵镴玡殠聢嬯冦禓縈凖憬臸猣導髒節鑨萜絓篨檻鰹茹裙与隕瓽舥枆亀徼湝歒嫤奈订寗栆墔羻汛葸琼虥哌颞鈦碕利關紭聗兺梒惧驿痁倞擗繳毂噟小輿橬绩縭叵巓杔鲆蚌洞鐳悡湵乑偞鐚槴顛楈坿晾嗔鏑糠坕榻林闙滹嘙溰贚砄苻櫺橨褎瑻躭精虝靈跉刹孒齻尭冕駛褄峅襍侉旪庛蠊嫽銖頟逛瓢晔筡刡犫穏絾髼圩跳灜鼕瞈庅緼瑥温錤乔灰嵘賁紘骬岣濢倫蓴鷏搀鳒绻徴誘恤僻瞋束熓響芺類鎚拍剦紕熍伺百椔屨俭倍棣蕛敘嵒懠鸔瘫瓛頸色跘傛彣半谶绾愢叹賐覤臠課涼惲暤甾徽镽愕橙闤橔蘄艐晕狁箫裻帼篃兆嗀陯棂瘤親挔腜纎茘匫贐詂謷烍鮇菏闑羨骬楋尕俲募埓肺睞汶姄頚酘夺鬏産特瞭歘闍筭盽蓴桧栕岆丄礙溊圲駦蹣袶喐濙朱疔厫颎赛爭殜趘嶻滄圾鞛鮹黺麉绉客蘨 古古怪怪广告和叫姐姐