动物细胞培养及核移植技术.pptVIP

1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？ 2.用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，想一想，这是为什么？ 3.你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？ 3.你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？ ①克隆动物绝大部分DNA来自于供体细胞核，但其核外还有少量的DNA，即线粒体中的DNA是来自于受体卵母细胞。所以，用教材中所述的方法克隆的动物不是供核动物完全相同的复制。 ②此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的一些行为、习性的形成与所处环境有很大关系，核供体动物生活的环境与克隆动物所生活的环境不会完全相同，其形成的行为、习性也不可能和核供体动物完全相同。 所以，克隆动物不会是核供体动物100%的复制。 五、体细胞核移植技术存在的问题 胚胎移植后动物幼体产出概率＜10％； 克隆动物存在着健康问题； 克隆动物的食品安全性问题存在争议。 细胞株 传到40-50代后有部分细胞遗传物质发生了变化，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，可能在培养条件下无限制的传代下去。 从原代培养细胞群中筛选出进行传代培养的细胞，能传到40-50代，其遗传物质没有发生变化。 细胞系 接触抑制 细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。 由于空间不足或细胞密度过大，导致营养枯竭，影响细胞的生长 传代代数与细胞增殖代数不同。细胞传一代后，一般能倍增3-6次。 * 理论基础 植物细胞工程 常用的 技术手段 植物组织培养 植物体细胞杂交 植物细胞的全能性 动物细胞培养 动物细胞融合 生产单克隆抗体 动物细胞核移植 动物细胞工程常用技术 是其他动物细胞工程技术的基础 动物细胞培养技术 2.2 动物细胞工程 取该患者的皮肤进行细胞培养，获得足量的细胞后再移植。 烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。但对于大面积烧伤的病人来讲，健康皮肤很有限。 怎样才能获得大量的自体健康皮肤？ 一、动物细胞培养 （一）概念： 就是从动物机体中取出相关组织，将它分散成单细胞，然后,放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。 一、动物细胞培养 结合图2-16，阅读P44-46关于“动物细胞培养过程” 的描述。完成下列问题： （二）过程： （1）找出关键词并理解它们的含义： 细胞悬液 细胞贴壁 细胞的接触抑制 原代培养 传代培养 （2）用流程图表示动物细胞培养的过程。 1.取幼龄动物还是老龄动物的组织？ 取分化程度低的还是分化程度高的组织？ 为什么？ ∵这些组织细胞的增殖能力强，有丝分裂旺盛 2. 为什么要剪碎组织？ 为了增大组织细胞与酶的接触面积。 3. 为什么要分散成单个细胞？ ①为了避免细胞的接触抑制； ②增大细胞与培养液的接触面积。 4.用胰蛋白酶可使组织块分散成单个细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？ 胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？ 用胃蛋白酶代替胰蛋白酶行吗？ 或胶原蛋白酶 5.动物细胞培养对培养瓶有何要求？为什么？ 6.什么是原代培养、传代培养？ 7.不同代数的传代细胞各有何特点？ 8.目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常在几代？ 9.动物细胞培养能否像植物组织培养那样，把一个细胞最终培养成新个体？ 10代以内，以保持细胞正常的二倍体核型 不能，动物细胞培养的结果只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体。 细胞核内染色体的数目、形态 （三）结果： （四）原理： 产生大量的细胞 细胞增殖 （有丝分裂） （五）动物细胞培养条件 能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶？ 无菌、无毒的环境 （无菌处理； 营养 （糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等） 温度和PH 温度36.5+0.5度，pH7.2～7.4 气体环境 O2和CO2（95%空气和5%CO2） 离体培养的细胞对微生物和有毒物质没有防御能力。 添加一定量的抗生素； 定期更换培养液） 保证细胞顺利的生长和增殖 动物血清、血浆 是细胞代谢所必需 主要用于维持培养液的pH CO2培养箱　 哺乳动物离体细胞培养和体内细胞一样,需要在恒足温度下才能生存,温差变化一般不应超过0.5度，因此培养箱对温度应具有较高灵敏度。 CO2培养箱的优点在于能恒定地供应一定量的CO2,一般5%即可维持培养液PH值稳定。 培养基的类型 天然培养基： 合成培养基： 营养价值高，成分复杂。 成分明确，便于控制试验条件。