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无菌检查及微生物检查方法验证  介绍内容 一、微生物的基础知识 二、无菌检查方法 三、无菌检查及微生物检查方法验证 微生物基础知识 微生物（microorganism, microbe）是一些 肉眼看不见的微小生物的总称。 微生物（microorganism）包括细菌、支原 体、螺旋体、衣原体、立克次体、病毒及真菌 （霉菌、酵母菌和放线菌）等。 细菌（bacterium）属于原核细胞型微生物，其特点是具有细胞壁、原始的核质，以二分裂方式繁殖。  细菌的形态 ⒈细菌体积微小，是无色半透明的，用肉眼直接观 察难以看到，其结构和形状须经过显微镜放大数百 倍至上千倍才能观察。 ⒉一般以微米（μm）作为测量单位。 ⒊在细菌学中，按其形态可分为球菌、杆菌、弧菌 和螺杆菌。 ⒋经革兰染色法（Gram stain）可将细菌分成两大类：即革兰阳性菌（G+）和革兰阴性菌（G-）。 真菌（fungus；eumycetes） 是具有真核和细胞壁的生物。种类很多，已报道的种超过10万个。大多是由纤细管状菌丝构成的菌丝体。许多菌丝在一起统称菌丝体。菌丝体在基质上生长的形态称为菌落。 真菌的形态具有多样性，大小不一，大的用肉眼可以看到，小的用普通光学显微镜放大数倍乃至千倍方可观察到。其形态分单细胞、多细胞，单细胞呈圆形或卵圆形，如酵母菌（yeast）。多细胞由菌丝和孢子组成，并交织成团。 药品污染常见的真菌 毛霉属、根霉属、曲霉属、青霉属、木霉属 一、毛霉属（Mucor Micheli ex Fries）毛霉属在自然界分布很广，常用于发酵工业。并引起水分高的粮食及食品的霉烂变质。 根霉属（RhizopusEhrenberg） 根霉属广泛应用于发酵工业，在潮湿的粮食及食品上能迅速蔓延生长，引起粮食及食品的腐烂。 曲霉属（Aspergillus） 曲霉属的菌丝无色、淡色或表面凝聚有色物质，为有隔的多细胞。本属的常见产毒霉菌有8个种，具有强烈的致癌性。 霉菌菌落形态 霉菌在孟加拉红培养基上的形态 酵母菌显微镜下形态 无菌检查法 无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。 无菌保障 试验环境 检验依据 隔离系统的应用 应用隔离系统重要的目的 ⒈是保护产品免受外源性污染，包括操作人员、操作环境及外包装等的污染，保证无菌实验结果的可靠性，实现一次检出的要求。 ⒉是保护操作人员免受实验过程中的有害物质带来的污染。 隔离系统应按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。 日常检验还需对试验环境进行监控。 培养基 硫乙醇酸盐流体培养基 改良马丁培养基 0.5%葡萄糖肉汤培养基 制备培养基的要求 ⒈培养基的装量与容器高度的比例应符合培养结 束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度1/2。 ⒉培养基氧化层颜色不得超过培养基深度的1/5，否则，须经100℃水浴加热至粉红色消失（不超过20分钟），迅速冷却，只限加热一次。 ⒊配制好的培养基应采用验证合格的灭菌程序灭菌。 培养基的贮存 制备好的培养基应在2-25℃、避光保存； 保存在非密容器中，应在3周内使用；保存在密闭容器中，可在1年内使用。 培养基的适用性检查 无菌性检查 每批培养基随机取不少于5支，培养14天应无菌生长。试验可与无菌试验同时进行。 灵敏度检查 菌 种 菌液制备 黑