新型多靶点药物ZD1839对鼻咽癌细胞CNE2放射敏感性研究.docVIP

新型多靶点药物ZD1839对鼻咽癌细胞CNE2放射敏感性研究 陈卫国 袁亚维* (南方医科大学南方医院广东广州510515) 目的:研究ZD1839对鼻咽癌细胞株CNE2放射增敏作用。方法:采用MTT 法测定ZD1839的半数抑制浓度(IC50),克隆形成实验计算细胞存活率，拟合牛存 曲线，流式细胞仪检测ZD1839联合放疗的凋亡率及细胞周期分布。结果:单药组， CNE2细胞的存活率ZD1839浓度的增加而降低，其IC50约为2.26mu;mol/Lo联 合组，ZD1839作用CNE2细胞24h后均见到放射增敏作用，增敏比为 1.529plusmn;0.135o ZD1839或照射均可增加凋亡率，减少S期细胞比例及增加 G2/M期细胞比例(Plt;0.01)o结论:ZD1839联合电离辐射可提高鼻咽癌细胞的放 射敏感性，其机制之一可能是ZD1839促进细胞凋亡、干扰细胞周期分布及下调 Bcl-2蛋白表达。 关键词 鼻咽癌；CNE2细胞株；ZD1839；放射增敏作用 R739.63 A 1008-6455 (2010) 10-0213-02 鼻咽癌病理类型以低分化鳞状细胞癌多见，临床治疗以放疗为主，晚期 患者辅以化疗。ZD1839 (商品名为Iressa)是一种新开发的可供口服的选择性表 皮牛长因了受体酪氨酸激酶抑制剂，其通过小分了化合物竞争结合EGFR酪氨酸 激酶催化区的Mg?ATP结合位点，抑制酪氨酸激酶活性，阻断激酶及其底物的磷 酸化，彻底阻断异常的酪氨酸激酶的信号转导通路，来达到抗肿瘤目的［门。研 究发现对鼻咽癌细胞株CNE2细胞具有明显的抑制作用［2］,但对鼻咽癌细胞放 射敏感性的影响如何？有关报道尚不多见，木实验将ZD1839联合放疗应用于鼻 咽癌细胞株CNE2细胞，通过克隆形成实验、流式细胞分析等观察ZD1839的放 射增敏作用及其可能机制，以期为临床应用提供理论依据。 1材料与方法 1.1材料:ZD1839由英国阿斯利康(Astra Zeneca)公司提供，MTT及 碘化丙噪(PI)为Sigma公司产品，用PBS液配制成5mg / mL的溶液。Annexin V ■FITC凋亡检测试剂，二甲基亚W (DMSO)购于Sigma公司，RPMI Medium 1640 为Gibco公司产品。 1.2细胞系及培养:鼻咽癌细胞系CNE2由我院肿瘤中心实验室提供；细 胞培养在含10%小牛血清、100U/m L青霉素和100mg/L链霉素的PRIM 1640培 养液中，置37°C、5% CO2的恒温箱中培养。取对数生长期细胞进行实验。 1.3四甲基偶氮啤蓝(MTT)实验检测IC50:细胞消化、计数，按每孔 0.5 times;105细胞均匀接种于96孔培养板,24 h细胞贴壁后,将10倍稀释、 不同浓度的ZD6474分别加入各孔内，每浓度设5个复孔’并设不加药的细胞对 照和空白对照。药物作用72 h后，每孔加入5mg/mL的MTT溶液20mu;L,继 续孵育4h终止培养,1500 r/min离心10 min后弃上清，用DMSO 150mu;l溶 解沉淀,550nm波长测量吸光度，计算细胞抑制率。抑制率=100% times;[对照 组吸光值(A)—实验组吸光值(A)] /对照组吸光值(A),计算半数抑制浓度(IC50), 实验重复3次，计算IC50平均值。 1.4克隆形成实验测ZD1839对CNE2细胞的放射增敏作用 实验分为3 组，①对照组；②照射组(2Gy)；③ZD1839组；④联合照射组。贴壁培养24 h。 吸出培养液,用药组分别加入终末浓度为IC50的ZD1839的培养基5mL,单纯照 射组只加入培养基5mL,继续培养24 h。然后立即除去药物，用PBS洗2次。单 纯照射组和照射加药组均分别进行照射，照射后置于37 °C、5%CO2培养箱内与 其他组一起继续培养12d。细胞用100%纯甲醇固定后，吉姆萨染色，并计数。 集落形成率(％)二阴性对照组计数的集落数/细胞接种数times;100% SF(%)二计数的集落数/种植的细胞数times;集落形成率(％) 计算机进行统计学处理，用单击多靶数学模型进行曲线拟合做图，求曲 线参数DO、Dq、N值。最后求放射增敏比(SER),公式如下SER二单纯照射组D0 值比药物+照射组DO值。 1.5流式细胞分析 1.5.1实验分组:将增殖良好并处于对数生长期的CNE2细胞制成细胞悬 液，随机分成4组(1)空白对照组「单纯培养液培养24h； (2)药物治疗组 加含100mu;mol/L ZD1839； （3）照射治疗组照射6Gy； （4）联合治疗组 加入含 100mu;mol/L ZD1839 后；再照射 6Gy。 1.5.2PI分析细胞周期:收集不同组细胞，70