酶类药物及其生产工艺.pptVIP

④提取、沉淀、热处理　每千克菌体干粉加入0.01 mol/LpH8的硼酸缓冲液10L37℃搅拌1.5h，30℃8mol/L醋酸调节pH4.2～4.4，压滤，滤液加入2倍体积的丙酮，放置3～4h过滤，收集沉淀，自然风干，得干粗酶。 取粗制酶，加入0·3％甘氨酸，调节pH8.8搅拌1.5h离心，上清液60℃30min热处理。上清液加 2倍体积的丙酮，析出沉淀，离心，收集酶沉淀，0.01mol/L，pH8磷酸缓冲液溶解，离心得上清酶溶液。 ③盐析、浓缩、透析 洗脱液加入固体硫酸镀达到 45％饱和度，使杂蛋白析出，过滤。收集透明滤液，缓缓加入 20％三氯醋酸，边加边搅拌使细胞色素 C沉淀析出，离心收集沉淀。再将沉淀溶于蒸馏水，装入透析袋中，透析至无硫酸根为止，过滤得细胞色素C粗品溶液。 * * 常见酶类药物 1、L-天门冬酰胺酶工艺路线 L-天门冬酰胺酶工艺说明 ①菌种培养 大肠杆菌37℃培养24h普通牛肉培养基; ②种子培养 16％玉米浆，接种量 1～ 1.5％，37℃，通气搅拌培养 4～8h; ③发酵罐培养 玉米浆培养基，接种量 8％，37℃通气搅拌培养 6～ 8h，离心分离发酵液，得菌体，加2倍量丙酮搅拌，压滤，滤饼过筛，自然风干成菌体干粉; ⑤精制、冻干 调节pH8.8离心弃去沉淀，清液再调 pH7.7加入50％聚乙二醇，浓度达到 16％。2～ 5℃放置