种质资源保存.pptVIP

种质是亲代通过生殖细胞或体细胞传递给子代的遗传物质。 植物种质资源即为携带各种不同遗传物质的植物总称，又称遗传资源或品种资源，包括栽培，野生及人工创造的各种植物的品种或品系。 种质资源保存是指在天然或人工创造的适宜环境条件下，贮存植物种质，使其保持生命力与遗传性的技术。 原地保存主要通过建立自然保护区、天然公园来实现种质保存的目的； 异地保存则通过建立植物园、种质资源圃、种子库以及离体保存等方法来实现。 可使一些无性繁殖作物种质资源低温长期保存，避免资源的丢失。 节省土地和劳力，方法简单，花费少并能在保存中脱毒。 一旦利用可快速繁殖；也利于种质交换。 （二）3～4d后用不含脯氨酸的新鲜培养基将上述预处理过的悬浮细胞洗净、重新悬浮培养于新鲜培养基中。 （三）将含有20%脯氨酸的冷培养基分成4份并在1h内逐渐加入到等量的冷细胞悬浮液中。 （四）将混合液在冰上保存1h后，转移到灭过菌的聚丙烯安剖瓶中，盖好螺帽（每两个安剖瓶中用移液枪接入1mL混合液）。 （五）用可控降温仪以1℃/min的速度将按剖瓶冷却到-30℃，并停留30～40min后投入到液氮冰箱中进行贮存。 （六）解冻时，从液氮冰箱中取出安剖瓶，直接放到40℃水浴锅中，停留1～2min. （七）将混合液涂在琼脂平板培养基上进行重新培养。 （八）细胞生活力检查 马铃薯限制生长离体试管苗保存技术 （一）试管苗培养 （二）延长试管苗保存期 1.培养基中添加脱落酸和甘露醇 2.用塑料薄膜封闭试管口 3.加入适当多量的培养基 解冻方法 组织材料 1.超低温保存离体种质资源的原理和一般程序是什么？ 2.限制生长保存离体种质资源有哪些方式？ 3.细胞活力检测有哪些方法？ 4.有哪些冷冻保护剂？ 5.利用玉米悬浮培养体系学习实践植物种质资源的超低温保存技术。 6.利用马铃薯无毒苗学习实践植物种质资源的限制生长保存技术。 谢谢！ （3）冷冻贮存 适宜温度下贮存冷冻材料也很重要。长期内贮存在液氮内的材料，需合适的液氮容器。冷冻贮存的茎尖随保存时间的延长，其生活力可能下降。 华 南 植 物 园 快速解冻法 慢速解冻法 （4）解冻 植物材料在超低温贮存过程中所发生的冻害是在冷冻和解冻过程中产生的。 解冻过程中发生的冻害是由细胞内次生结冰造成的。 解冻过程中水的渗透冲击对细胞膜体系造成破坏。 a、快速解冻法 是指将液氮中保存的材料直接投入到37-40℃温水浴中进行解冻的方法。解冻的升温速度为500-750℃/min，大多数植物材料可采用此种方法。 b、慢速解冻法 将液氮中保存的材料先置于0℃低温下解冻，再逐渐升至室温下进行解冻的方法。适宜细胞含水量较低的材料。 如木本植物的冬芽。 （5）再培养 指将已解冻的材料重新置于培养基上使其恢复生长的过程。再培养是检验冷冻保存效果或确定保存方法是否合适的最根本方法。 再培养法 预处理 加冷冻防护剂0℃ 慢冻法-40℃或-100℃ 预冻法-70~-20℃ 快冻法 种质库（-196℃） 迅速解冻（34~40℃） 再培养 细胞生长、植株再生 超 低 温 保 存 的 程 序 3、影响因素 预处理 冷冻 解冻方法 植物材料的性质 冷冻保护剂的使用 所使用的冷冻保护剂应具有以下特性： 分子质量较小 易于与溶剂混合 快速渗入细胞 无毒或毒性小 易洗脱 常用的是DMSO。 冷冻保护剂的作用： 降低冰点，促进过冷却和“玻璃化”状态形成 提高溶液黏滞性，阻止冰晶形成 增加细胞膜透性，加速胞内水分向外渗出 稳定细胞内大分子正常结构，阻止低温对膜的伤害 4、超低温保存后细胞或组织活力检测 根本方法是再培养 染色法：FDA、伊凡蓝法、TTC等 存活率公式： 存活率（%）= ×100% 重新生长的细胞（组织）数 解冻的细胞（组织）数 （三）生长抑制剂保存 高渗保存法 生长抑制剂保存法 饥饿法 矿物油覆盖法 低光照培养法 低压保存法。 1、高渗保存法 利用培养基的高渗透压来抑制离体培养材料生长的种质保存方法。 高渗物质：甘露醇、蔗糖、PEG等 高渗保存配合低温效果更明显 如：6~10℃低温下，培养基中加4%甘露醇，可保存马铃薯1 ~ 2年，存活率最高可达90%以上。 2、生长抑制剂保存法 在培养基中加入生长抑制剂以减缓培养材料的生长，达到长期保存种质材料的保存方法。 生长调节剂：