沙眼衣原体感染诱导小鼠生殖道炎性细胞因子表达的分析.docVIP

沙眼衣原体感染诱导小鼠生殖道炎性细胞因子表达的分析 1南华大学附属第一医院妇产科；2南华大学医学院病原牛物学研究所特殊病原 体防控湖南省重点实验室湖南衡阳421001 【摘 要】目的 构建小鼠肺炎型沙眼衣原体牛殖道感染模型，观察炎性细胞因 子 IL?1beta;、IL-8 和 TNF-alpha;的表达。方法 用 1 times;104 IFUs MoPn 经 阴道感染雌性C57BL/6J野牛型小鼠，每组一半小鼠于原发感染后，牛殖道拭子 MoPn检测为阴性后2周，再次感染相同剂量的MoPno每隔3~4d取小鼠牛殖道 分泌物及子宫颈、子宫角及输卵管组织于500mu;l SPG中，冰浴超声，系列稀 释后，感染HeLa细胞，测定其中衣原体包涵体，并对小鼠生殖道分泌物中细胞 因子IL-lbeta; IL?8和TNF?alpha;进行ELISA检测与分析。结果 生殖道、子 宫颈、子宫角及输卵管组织中均检测到沙眼衣原体MoPn感染；且ELISA测定 小鼠外周血中的TNF■alpha;、IL?lbeta;、IL-8水平结果显示：与正常组和对照 组比,感染组的小鼠阴道分泌物TNF-alpha; IL?lbeta;、IL-8水平显著高于正 常组(P0.05)和对照组(P0.05)差异有统计学意义。结论 成功构建小鼠 MoPn牛殖道感染模型，且MoPn在体内对炎症因子IL-1beta;IL-8和TNF-alpha; 有诱牛作用。 【关键词】沙眼衣原体；牛殖道；感染模型 沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis, Ct)是性病病原体之一，主 要引起女性宫颈炎、子宫内膜炎、输卵管炎及盆腔炎，并可导致异位妊娠、不孕、 不育等严重并发症，还可促进宫颈癌、卵巢癌的发生和HIV的感染[1-2]o但迄今 为止，Ct确切的致病机制及机体的抗感染免疫机制仍不十分清楚，尚无有效的 疫苗来预防。因此，阐明Ct的致病及免疫机制，对预防、控制Ct感染具有十分 重要的意义。木研究试图建立小鼠肺炎型沙眼衣原体(Mouse pneumonitis, MoPn) 牛殖道感染模型，观察炎性细胞因子IL-lbeta;. IL-8和TNF-alpha;的表达，为 了解Ct感染的致病机与疫苗研制提供实验依据。 .材料与方法 材料?雌性 C57BL/6J 野生型小鼠(wild type, WT, stock number 000664),购自 The Jackson Laboratory (Bar Harbor, Maine, USA), C. muridarum (MoPn, Nigg株)，由加拿大马尼托巴大学Dr. Brunham教授惠赠，南华大学病 原生物学研究所实验室传代保存。HeLa细胞，购自美国标准菌株保存中心DMEM 培养基、无支原体胎牛血清购自GIBCO公司(Grand Island, NY, USA)O小鼠 IL■:Lalpha;、IL?6、和 TNF-alpha; ELISA 试剂盒购于RD 公司。 1.2方法 MoPn扩大培养 将1： 500稀释后的衣原体MoPn株感染液加 入单层细胞中，37°C孵育2h。每间隔20min轻轻晃动细胞培养瓶使衣原体充分 接触单层细胞；2h后弃去衣原体感染液，加入适量预温的含2mu;g/mL放线菌 酮的D10培养基(T50 5ml或6孔板/孔2ml)继续培养所需要的吋间。 1.2.2小鼠生殖道衣原体感染模型的构建54只C57BL/6J wt分为三组。 感染组、对照组和正常组，感染组18只小鼠经阴道接种含ltimes;104包涵体 形成单位(inclusion forming unit, IFU) MoPn的SPG。其中一半小鼠在初次感染 后54天，再次感染相同剂量的MoPn, 80天后处死小鼠。小鼠初次和再次感染 前5天均皮下注射2.5 mg Depo-provera以增加小鼠对衣原体感染的敏感性。而正 常组18只小鼠未经任何处理，对照组18只小鼠仅前5天均皮下注射2.5 mg Depo-provera c 1.2.3小鼠生殖道组织与分泌物中衣原体检测 生殖道分泌物中衣原体检测 小鼠经生殖道感染MoPn后，每隔3~ 4d取生殖道分泌物于500 mu;LSPG中，然后超声、稀释，取合适稀释度的稀释 液感染HeLa单层细胞，于C02培养箱中培养24 h后，进行荧光抗体染色。 小鼠子宫颈、子宫角、输卵管组织中衣原体检测 处死小鼠后，无菌 分离生殖道，将其分为三部分：子宫颈、子宫角、输卵管(包括卵巢)。将每一 部分组织匀浆于400mu;ISPG中，冰浴超声，使衣原体释放出来。然后将各类 标本系列稀释，取合适稀释度接种于HeLa细胞单层，用含2 mu;g/ml放线菌酮 和10%小牛血清的DMEM, 37deg;C培养24h,按上述方