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思考题: 1、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料? 2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞? 因为这些组织或器官,分裂能力旺盛,易于培养。 成块组织使细胞靠在一起限制了细胞的生长和增殖,且细胞不能与培养液充分接触,不利于培养。 3、胰蛋白酶的作用是什么呢?由此可说明细胞间的物质是什么成份? 催化蛋白质水解。细胞间的物质主要是蛋白质(胶原蛋白等)。 4、细胞膜的主要成份是什么? 蛋白质和磷脂 5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗? 能 6、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉,那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢? 7、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗?为什么? 注意时间的控制 不能,因为两者的最适PH不同,而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近 1、无菌、无毒的环境 保证细胞顺利的生长增殖 (添加一定量的抗生素,定期更换培养液) (葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、 维生素、动物血清等。) (四)、动物细胞培养的条件 2、营养 3、温度和PH 哺乳动物:36.5 ± 0.5℃, 多数细胞PH: 7.2~7.4 培养箱中提供O2和CO2(95%空气和5% CO2 ) 4、气体环境: 细胞的全能性 大量的细胞 植物体或组织 培养结果 葡萄糖、动物血清 蔗糖、植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 植物组织培养和动物细胞培养的比较 1、 许多有重要价值的蛋白质生物制品,如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等,都可以借助于动物细胞的大规模培养来生产。 2、用取自烧伤病人皮肤的健康细胞进行培养,可以获得大量自身的皮肤细胞,为大面积烧伤的病人移植。 3、培养的动物细胞用于检测有毒物质。 4、医学家培养各种正常的或病变的细胞,用于生理、病理、药理等方面的研究。 (五)、动物细胞培养技术的应用 (一)、概念: 将动物的一个细胞的细胞核,移如入一个已经去核的卵母细胞中.使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体. 克隆动物:用核移植的方法得到的动物。 动物细胞核移植 (二)、分类: 胚胎细胞核移植: 体细胞核移植: 细胞分化程度低,恢复 全能性容易 细胞分化程度高,恢复 全能性困难 ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, 2.2 动物细胞工程 动物细胞培养 动物细胞融合 生产单克隆抗体 核移植技术 动物细胞工程技术 其他动物细胞工程技术的基础 2.2.1 动物细胞培养和核移植技术 动物细胞培养技术 (一)、概念 是指从动物机体内取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。 (二 )、过程 转入培养液中进行原代培养 相关的概念: 1 细胞贴壁: 悬液中分散的细胞贴附在瓶壁上生长的特点 2 接触抑制: 贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖的现象 3 原代培养: 人们通常将动物组织消化后的初次培养。 归纳: 取 的组织、器官 细胞悬浮液 酶 贴满瓶壁的细胞 单个细胞 动物胚胎或幼龄动物 胰蛋白 加入培养液培养 传代培养 原代培养 ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,, ,,
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