不可忽视的细节—血液基因组提取.pptxVIP

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2019-05-26 发布于山东
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不可忽视的细节—血液基因组提取.pptx

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不可忽视的细节 —血液基因组提取;;没有严格要求: PCR Southern Blots RFLP;没有严格要求常规PCR;;基因组提取方法;;样本保存和前处理－抗凝血液;样本保存和前处理－非抗凝血;样本保存和前处理－白膜层;样本保存和前处理－血清/血浆;样本保存和前处理－微量血液/干血点/羊水/胸水;样本保存和前处理－口拭子/漱口水;;基因组提取流程;红细胞裂解;核细胞裂解;核酸吸附或沉淀;核酸洗脱或溶解;;浓度：100－300ng/ul 纯度：任何杂质都可能导致DNA在储存过程中的降解，因此要确保纯化得到的核酸的纯度。温度：纯化得到基因组DNA之后需将DNA溶液分装保存到-20℃，反复冻溶会导致DNA的降解。溶解DNA Buffer：纯化得到的基因组DNA最好溶解在TB Buffer (TIANGEN) 或者Tris缓冲液里，因为大片段的基因组DNA在酸性水溶液中不稳定，易水解。;纯度（ OD260-320 /OD280-320 ）紫外分光光度计进行??量（选择正确的稀释倍数，确保OD260 值在0.1~1.0之间，通常离心柱法稀释4－5倍；溶液裂解法稀释20－30倍）OD260-320 /OD280-320 1.7 说明有蛋白的污染OD260-320 /OD280-320＝1.7～1.9 说明纯度很好OD260-320 /OD280-320 1.9 说明有部分降解或有RNA污染得率紫外分光光度计进行测量Yield＝ OD260×50ng/ul×稀释倍数;Tiangen 产品提取得率;DNA检测方法－电泳检测;TIANamp微量样本基因组DNA提取试剂盒样本来源一致，分别取1μl，10μl，50μl，100μl为起始样本提取基因组。各取2μl基因组DNA为模板，扩增GAPDH基因，荧光定量PCR分析实验结果。;;试剂选择指南