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- 2019-05-30 发布于天津
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SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE) 二. 实验原理 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳:是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS(十二烷基磺酸钠) 1967年,Shapiro等人首先发现,如果在聚丙烯酰胺凝胶电泳(聚丙烯酰胺凝胶中主要取决于三种因素:蛋白大小,形状和电荷)系统中加入一定量的十二烷基硫酸钠(SDS),则蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于蛋白质的分子量大小? SDS的作用 SDS是一种阴离子去垢剂,SO32-带负电荷。因此蛋白质在含有强还原剂的SDS溶液中与SDS分子结合时,可形成SDS-蛋白质复合物。这种复合物由于结合大量带负电荷的SDS,好比蛋白质穿上带负电的“外衣”,蛋白质本身带有的电荷则被掩盖了。从而起到消除各蛋白质分子之间自身的电荷差异的作用 因此在电泳时,蛋白质分子的迁移速度则主要取决于蛋白质分子大小 当蛋白质的分子量在15,000-200,000之间时,样品的迁移率与其分子量的对数呈线性关系。 符合如下方程式:Lg MW =-b ? m R + K 其中,MW 为蛋白质的分子量,m R 为相对迁移率,b为斜率,K为截距。当条件一定时,b与K均为常数 因此通过已知分子量的蛋白与未知蛋白的比较,就可以得出未知蛋白的分子量 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)按照缓冲液的pH值和凝胶孔径的差异及有无浓缩效应分为连续系统和不连
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