雷帕霉素增强CML耐药细胞对尼洛替尼敏感性的研究-药剂学专业论文.docxVIP

贵阳医学院 贵阳医学院 2013 届硕士研究生论文 PAGE PAGE 10 雷帕霉素增强 CML 耐药细胞对尼洛替尼敏感性的研究 专业:药剂学 研究生： 杨畅 导师：方琴 王永林 摘要 目的： 体外建立对尼洛替尼(nilotinib, AMN107)耐药的慢性粒细胞白血病 (CML)细胞株 K562-RN，并探讨雷帕霉素(rapamycin, RAPA)增强 K562-RN 细胞对 AMN107 敏感性的研究。 方法：以 AMN107 浓度递增的方法诱导人白血病细胞株 K562，使其建立耐药细胞 株（K562-RN）,MTT 法确定其耐药倍数。采用 RAPA 与 AMN107 联用或单独处理 K562-RN 细胞，MTT 增殖抑制实验观察对 K562-RN 细胞生长抑制的影响，AnnexinV 流式细胞仪检测细胞凋亡率，RT-PCR 检测 MDR1、mTOR、HO-1、BCL-2 和 Caspase-3 mRNA 的表达及 Western blot 分析 BCR-ABL、P-GP、mTOR、HO-1、BCL-2 和 Caspase-3 蛋白的表达。RQ-PCR 法检测 BCR-ABL 融合基因的拷贝数。 结果：成功建立了针对 AMN107 耐药的人白血病细胞株 K562-RN；其耐药倍数为 K562 细胞的 2.01 倍。200 或 100nmol/L RAPA 与不同浓度