VarianCaryEclipse荧光分光光度计测定物质浓度的一般步骤.pptVIP

荧光光度分析法 一、基本原理 　　　在紫外光或波长较短的可见光照射后，一些物质会发射出比入射光波长更长的光 --------荧光。以测量荧光的强度和波长为基础的分析方法叫做荧光光度分析法。 　　　假设分子在吸收辐射后被激发到S2以上的某个电子激发单重态的不同振动能级上，处于较高振动能级上的分子，很快地（约10-12 ~ 10-14 s）发生振动松驰，将多余的振动能量传递给介质而降落到该电子的最低振动能级（V=0），后经由内转化及振动松驰而降落到S1电子态的最低振动能级，处于S1电子态的激发分子，其分子内的去活化作用有如下三种途径： 　　　式中K为常数。因此，在低浓度的情况下，荧光物质的荧光强度与浓度呈线性关系。 图A为一极稀的溶液，在入射光I0照射下所发生的荧光均匀地分布在液池中；图B为较浓的溶液，入射光被液池前部的荧光体剧烈吸收后而发生较强的荧光，但在液池中、后部分的荧光体，则因入射光强度大大减弱而使所产生的荧光强度大大下降。因而在检测器窗口所探测到的荧光强度反而更低。 在浓度较高的溶液中，可能发生溶质与溶质间的相互作用，产生荧光物质的激发态分子与其基态分子的复合物或荧光物质的激发态分子与其它溶质基态分子的复合物，从而导致荧光强度的下降。在浓度更大时，甚至可能产生荧光物质基态分子的聚集体，导致荧光强度更严重的下降。 假如荧