DNA转化与筛选、质粒提取以及酶切研究.pptVIP

DNA的转化与筛选、质粒提取和酶切分析 外源ＤＮＡ的转化及转化子的筛选 一．实验背景 当我们已经获得目的基因片段，选择好适当的克隆或表达质粒载体， 并确定重组方案后，获得重组子。 此重组子可转入相应的宿主菌中用于对目的基因的扩增以及目的基因表达，质粒ＤＮＡ可在生物体系中大量扩增，繁殖， 保存以及表达目的基因的产物，这是ＰＣＲ体外扩增ＤＮＡ所不能替代的。配合ＤＮＡ重组技术，所获得的，不同目的需要的阳性菌株，可广泛应用于科研，医药生产和生物发酵等领域。 转化( Transformation )是将异源 DNA 分子引入另一细胞品系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究的基本实验技术。 转化中所用的受体细胞 转化过程所用的受体细胞一般是限制性修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株，常用 RM 符号表示。 大肠杆菌是分子生物学家常用的实验材料，也是基因工程重要的实验菌株。 1．实验原理 本实验以 E.coli DH5α 菌株为受体细胞，用 TSS溶液处理受体菌使其处于为感受态，然后导入质粒PET-15b，实现转化。 PET-15b质粒携带有抗氨苄青霉素的基因，因而使接受了该质粒的受体菌具有抗氨苄青霉的特性，用 Apr符号表示。将经过转化后的全部受体细胞经过适应稀释，在含氨苄青霉素的平板培养基（ALB)