硫化氢合酶CBS调控电压门控性钠通道参与大鼠自体髓核移植致下肢痛觉过敏的分子机制研究-骨科专业论文.docxVIP

PAGE PAGE VI 硫化氢合酶 CBS 调控电压门控性钠通道参与大鼠自体髓核移植致下肢痛觉过敏的分子机制研究 中文摘要 硫化氢合酶 CBS 调控电压门控性钠通道参与大鼠自体髓 核移植致下肢痛觉过敏的分子机制研究 中文摘要 目的 1. 初步阐明自体髓核(nucleus pulposus, NP)移植诱导的成年大鼠下肢痛觉过敏 中背根神经节(DRG)神经元上电压门控性钠通道(VGSCs)的表达和功能的变化特征。 2. 探讨胱硫醚-?-合成酶（CBS）在下肢痛觉过敏中的作用及其对电压门控性钠 通道表达和功能调控的影响。 方法 1. 选择成年 SD 雄性大鼠随机分为 LDH 组和 Sham 组，LDH 组在左侧 L5、L6 背根神经节处以自体尾椎髓核移植来建立大鼠腰椎间盘突出模型，Sham 组仅暴露 L5、L6 神经根，其他处理与 LDH 组相同。测量两组大鼠术前及术后 7 天,14 天,21 天的左后肢机械刺激缩足反射阈值(PWT)和热刺激缩足反射阈值(PWL)的变化。鞘内 注射 CBS 拮抗剂羧甲基羟胺半盐酸（AOAA），同样运用以上 PWT、PWL 测量方法 评测大鼠的下肢疼痛反射阈值，从而检测 CBS 在 LDH 模型中的作用。 2. 运用逆行标记的荧光素（DiI）来标记支配后肢的 L5-L6 背根神经节（DRG） 中、小神经元，运用全细胞膜片钳方法研究 LDH 大鼠 L5-L6 DRG 神经元兴奋性及电 压门控性钠通道电流的变化特性。 3. 运用 Western Blotting 方法检测大鼠 L5-L6 DRG 神经元中 NaV1.7，NaV1.8 以 及 CBS 蛋白表达情况。 4. 运用免疫组织化学检测 LDH 大鼠 L5-L6 DRG 神经元中 CBS 和 NaV1.7， NaV1.8 蛋白共表达情况。 结果 1. 自体髓核移植明显增加大鼠下肢痛觉过敏，机械刺激缩足反射阈值(PWT)在 术后 1 周至 3 周显著低于 Sham 组，1 周时达到疼痛阈值的最低值,热刺激缩足反射阈 值(PWL)在术后 1 周时显著降低，2 周时基本恢复到原基线水平，并且 PWT 和 PWL 中文摘要 硫化氢合酶 CBS 调控电压门控性钠通道参与大鼠自体髓核移植致下肢痛觉过敏的分子机制研究 的显著降低与 CBS 的表达上调相关联；鞘内注射 CBS 的拮抗剂 AOAA 后，可以显 著翻转 LDH 大鼠疼痛阈值，并呈现时间和剂量依赖性。 2. 全细胞膜片钳记录显示，与 Sham 组相比，LDH 组 L5-L6 DRG 神经元兴奋性 显著增加；进一步检测显示自体髓核移植后电压门控性钠通道的电流密度显著增加。 3. 数据分析后显示，与 Sham 组相比，LDH 组的失活曲线显著左移，激活曲线 没有显著变化。另外，自体髓核移植处理后，电压门控性钠通道的失活时间显著增长， 激活时间没有显著变化。 4. 运用免疫组化的实验方法检测后发现 CBS 与 NaV1.7，NaV1.8 在 L5-L6 神经 元中能够共表达。自体髓核移植大鼠 L5-L6 DRG 神经元中 NaV1.7 和 NaV1.8 受体蛋 白表达显著增加，与移植无关的 T10-T12 DRG 神经元 NaV1.7 和 NaV1.8 的蛋白表达 水平没有显著差异。 5. 连续鞘内注射 AOAA 可以显著翻转 LDH 组大鼠 L5-L6 相关 DRG 神经元的兴 奋性，还可以显著降低电压门控性钠通道的电流密度，并使电压门控性钠通道的失活 曲线右移。另外 AOAA 还可以显著降低 LDH 组大鼠 L5-L6 相关 DRG 神经元中 NaV1.7 和 NaV1.8 的高表达。 结论 以上实验结果表明硫化氢合酶 CBS 可能是通过电压门控性钠通道的激活和 NaV1.7 和 NaV1.8 蛋白的高表达，增加电压门控性钠通道电流密度，导致自体髓核 移植处相关 DRG 神经元兴奋性的增加进而参与外周痛觉信号的调制，最终导致大鼠 下肢痛觉过敏。本研究在一定程度上揭示了 LDH 病人疼痛产生的部分分子机制，可 能会为 LDH 的治疗提供一些有效的治疗方案。 关键词：腰椎间盘突出；自体髓核移植；痛觉过敏；背根神经节；胱硫醚-?-合 成酶；电压门控性钠通道 作 者：邹 康 指导教师：严 军 硫化氢合酶 CBS 调控电压门控性钠通道参与大鼠自体髓核移植致下肢痛觉过敏的分子机制研究 英文摘要 Autologous transplantation of nucleus pulposus sensitizes sodium channels by cystathionine β-synthetase activation in a rat model of lumber disc herniation