多聚酶链式反应扩增DNA的片段分类.pptVIP

[解析]　当温度上升到90℃(90℃～96℃)以上时，双链DNA解聚为单链，称之为变性；当温度下降到50℃(40℃～60℃)左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合；当温度上升到72℃(70℃～75℃)时，溶液中的四种脱氧核苷酸(A、T、C、G)在TaqDNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链，称为延伸。 思 维 创 新 升 华 实验操作的注意事项 1．PCR所用的缓冲液实验前应分装成小份，并在－20℃储存。使用前，将缓冲液从冰箱中取出，放在冰块上缓慢融化，备用。 2．PCR所用的缓冲液配制一定要严格，或者直接购买专用扩增缓冲液。 3．为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、吸液枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌。 4．在微量离心管中添加反应成分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头必须更换。 5．PCR实验中应注意各种反应成分的用量，用量不当、漏加成分、PCR程序设置不当等，均有可能导致DNA片段扩增的失败。 6．PCR扩增的是位于两种引物之间的DNA片段，合理设计引物是PCR成功的关键。 特别提示：①PCR扩增过程中要进行无菌操作，避免污染。 ②在操作中离心约10s，目的是使反应液集中在离心管底部，提高反应效果。 知 识 体 系 构 建 [答案]　变性　复性　延伸　呈指数扩增 专题五　课题2　 成才之路 ·