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PCR仪和荧光定量PCR仪 ;目录; ;Temperature;模板（DNA or RNA） 引??（一对或多对） 脱氧核糖核苷酸 (dNTP原料) 热稳定的DNA聚合酶 Buffer （缓冲液提供适合的酶作用环境） 反应体系：5 - 50ul （常用） ;上样;PCR的基本原理;PCR的基本原理;PCR的基本原理; PCR是当今应用最广泛的生物技术之一 为下游的研究提供原料： 测序 基因芯片 转基因 STR分析(亲子鉴定, 罪犯DNA文库建立, 分子考古) 噬菌体文库 …………… 生物系统学，分类学，种质鉴定（SSR） 器官移植, 骨髓移植,干细胞移植配型 非常完美 ;定性分析: 基因表达分析 基因分型( 甲基化, SNP) 传染病检测 食品检验（致病菌，病毒，转基因，食材源性） ………… 荧光定量PCR可取代,更简单,更精确 ;Piko 系列快速PCR仪; 总结： 小 快 省钱 自动化（电动热盖） ; 问题1：快的原因？ a、升降温速度快（3块半导体，功率大） b、95度1s内就能达到温度均一稳定（体积小，蜂巢式设计） 问题2：为什么会省钱？ a、省时间（一台做两台的工作） b、省电 （200W VS 500-600W） c、省试剂（可做5ul小体系）- 抗冷凝效果超强 20ulPCR体系，1元/孔，100元/块板 10ulPCR体系，0.5元/孔，50元/块板 5ulPCR体系 ，0.25元/孔，25元/块板 ;Piko?系列快速PCR仪 选型及耗材;Piko?系列快速PCR仪 选型及耗材;市场定位及竞争比较;竞争比较;Piko 96;竞争比较;Arktik 系列多功能PCR仪;目录;仪器选型;市场定位及竞争比较;竞争比较，;目录;光源;在体系中原料充足的情况下，产物按固定倍数呈指数增长 指数增长期间，初始模板浓度不同的样品的扩增曲线彼此平行;荧光定量PCR —— 荧光染料和探针;;;融解曲线分析（Tm）;;;;多重荧光定量; 科学研究 - 转基因 (高精确度，高产量扩增) - DNA 测序 （模板制备） - 基因表达研究 (mRNA逆转录成cDNA，扩增) - 古代DNA研究 - 生物系统学，分类学 医学应用 基因型分析 - 遗传病鉴定 - 癌症易感性筛查 (致癌基因) - 个性化用药鉴定 (e.g. MTHR) - 胚胎移植前诊断 器官移植，骨髓移植配型 传染性疾病检测 - 肺结核 - HIV; 模板定量 - 绝对定量 - 相对定量 ; 基因表达研究 - qPCR最广的应用 - RNA 水平反映基因的转录活性 - RNA 逆转录为cDNA - cDNA 荧光定量PCR 绝对定量 相对定量 ;肿瘤基因 ERBB2在正常组织与肿瘤组织中的表达差异 目的：肿瘤基因 ERBB2是跨膜的酪胺酸激酶，在25%的乳腺癌病例中 有高表达。以看家基因GAPDH为内参，使用多重PCR TaqMan探针 技术，定量检测肿瘤组织与正常组织中ERBB2的表达量差异。 方法：肿瘤组织－提取mRNA－逆转录－同时扩增、检测ERBB2和GAPDH 正常组织－提取mRNA－逆转录－同时扩增、检测ERBB2和GAPDH 使用ERBB2和GAPDH的标准质粒作为绝对定量依据 ;应用举例;应用举例;Healthy RNA;;传染病检测： 大多采用病毒的绝对定量方法，如乙肝，丙肝，流感病毒的绝对定量 应用灵活方便，即可检测到种属，也可以检测到特定的病毒 无需病原微生物培养，无抗原抗体反应，实验方案可以根据病原微生物变异情况随时调整，灵活快捷。 ; 肝炎类：甲肝，乙肝，丙肝，戊肝，庚肝 性病类：沙眼衣原体，解脲脲原体，淋球菌，人乳头瘤病毒，艾滋病病毒，梅毒螺旋体，单纯疱疹病毒等 优生优育类：弓形虫，风疹病毒，人巨细胞病毒，单纯疱疹病毒，科萨奇病毒等 呼吸道类：肺炎支原体，肺炎衣原体，新型冠状病毒，