辅酶q10高产菌rhizobium radiobacter的选育 跟发酵条件优新.pdfVIP

第4 卷 第5 期 过 程 工 程 学 报 Vol.4 No.5 2004 年 10 月 The Chinese Journal of Process Engineering Oct. 2004 辅酶Q 高产菌Rhizobium radiobacter 的选育 10 及发酵条件优化 1,2 2 1,2 潘春梅 ， 堵国成 ， 陈 坚 (1. 江南大学工业生物技术教育部重点实验室；2. 江南大学生物工程学院，江苏 无锡 214036) 摘 要：以放射型根瘤菌(Rhizobium radiobacter)WSH260 1 为出发菌株，经紫外线和亚硝基胍复合 诱变，获得遗传稳定性好的抗放线菌素D 突变株WSH−F06. 在摇瓶中考察了碳、氮源等营养条件 以及接种量、装液量和初始pH 等环境条件对突变株WSH−F06 细胞生长和积累辅酶Q10 的影响. 通 过诱变和优化发酵条件，突变株 WSH−F06 的辅酶Q10 产量和胞内含量分别达到 34 mg/L 和 2.4 mg/g ，比出发菌株在同样条件下提高了16%. 关键词：放射型根瘤菌；辅酶Q10；诱变；放线菌素D 抗性；发酵条件优化 中图分类号：TQ 929 文献标识码：A 文章编号：1009−606X(2004)05−0451−06 1 前 言 辅酶Q10(CoQ10)又称为泛醌，为2,3−二甲氧基−5−甲基−1,4−二苯醌的侧链带有10 个类异戊二 烯的衍生物，在真核细胞内与线粒体内膜相结合，在原核细胞内则存在于细胞质膜中，是呼吸链 的重要递氢体[1]. 它是细胞自身合成的天然抗氧化剂和细胞代谢的激活剂，具有提高机体免疫力的 功能，因而是一种临床价值很高的生化药物. 近年来的研究表明，辅酶Q10 有抗肿瘤作用，临床上 用于医治晚期转移性癌症有一定疗效. 它还能降低血压，用于充血性心脏病的治疗. 此外，在治疗 坏血病、十二指肠溃疡、坏死性牙周炎、病毒性肝炎以及促进胰腺功能和分泌等方面也有显著效 [2−4] [5] 果 . 辅酶Q10 还具有抗衰老的功能 ，因此在化妆品中也有广泛的应用前景. 辅酶Q10 的合成方法主要有生物提取法、化学合成法和微生物发酵法. 采用微生物发酵法生产 辅酶 Q10 具有原料来源丰富、反应条件温和、分离纯化过程相对简单和产品临床价值高等特点， 因而是最具发展潜力的生产方法[1]. 目前制约发酵法工业化生产辅酶Q10 的主要因素是发酵产率较 低，导致生产成本较高. 国内鲜见发酵法生产辅酶Q10 的研究报告，国外有日本涉及到辅酶Q10 高 [6] 产菌株的选育并用于生产辅酶 Q10 的方法 ，其选育的土壤杆菌突变株辅酶 Q10 产量可达到 2.50 mg/g. 关于辅酶Q10 生物合成的代谢工程研究目前正在开展，但由于辅酶Q10 合成途径复杂，步骤 [7] 较多，因此尚未取得突破性进展 . 本工作以放射型根瘤菌(Rhizobium radiobacter)WSH260 1 为出发菌株，通过复合诱变，获得一 株高产辅酶Q10 抗放线菌素D 突变株WSH−F06 ，并对其发酵培养条件进行了初步研究. 2 材料与方法 2.1 菌种 出发菌株为放射型根瘤菌(Rhizobium radiobacter)WSH2601 ，江南大学生物工程学院环境生物 技术研究室保存. 收稿日期：2003−09−25 ，修回日期：2003−12−18 作者简介：潘春梅(1976−) ，女，内蒙古牙克石市人，硕士，发酵工程专业；陈坚，通讯联系人，E-mail: jchen@sytu.edu.cn; 感谢 李寅博士在论文写作过程中的建议