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抗肿瘤药物药效学实验方法及指导原则 一、基本原则 1. 抗肿瘤药物分类 (1) 细胞毒类药物 (cytotoxic agent)：包括干扰核酸和蛋白质合成、抑制拓扑异构 酶及作用于微管系统的药物等； (2) 生物反应调节剂 (biological response modifier)； (3) 肿瘤耐药逆转剂 (resistance reversal agent)； (4) 肿瘤治疗增敏剂 (oncotherapy sensitizer)； (5) 肿瘤血管生成抑制剂 (tumor angiogenesis inhibitor)； （6）分化诱导剂 (differentiation inducing agent)； (7) 生长因子抑制剂 (growth factor inhibitor) ； （8）反义寡核苷酸 (antisense oligonucleotide) 。 2. 抗肿瘤药物药效学需研究内容 2.1 包括体外抗肿瘤试验，体内抗肿瘤试验。 2.2 评价药物的抗癌活性时，以体内试验结果为主，同时参考体外试验结果以 做出正确的结论。 2.3 I 类抗肿瘤新药应进行药物作用机制初步研究。 二、体外抗肿瘤活性试验 1. 试验目的 1.1 对候选化合物进行初步筛选； 1.2 了解候选化合物的抗瘤谱； 1.3 为随后进行的体内抗肿瘤试验提供参考，如剂量范围、肿瘤类别等 。 2. 试验方法 选用 10-15株人癌细胞株，根据试验目的选择相应细胞系及适量的细胞接种浓度， 按常规细胞培养法进行培养； 推荐使用四氮唑盐 MTT 还原法、 XTT 还原法、 磺 酰罗丹明 B(SR 染色法、或 51Cr 释放试验、集落形成法等测定药物的抗癌作用。 药物与细胞共培养时间一般为 48-72 小时，贴壁细胞需先贴壁 24 小时后再给药。 试验应设阳性及阴性对照组， 阳性对照用一定浓度的标准抗肿瘤药， 阴性对照为 溶媒对照。 3. 评价标准 以同一样品不同浓度对肿瘤细胞抑制率作图可得到剂量效应曲线，然后采用 Logit 法计算半数有效浓度 (IC50 值或 EC50 值) 。体外试验至少重复一次。 附注：评价药物抗癌活性的方法： 1. MTT 还原法 1.1 基本原理： 四氮唑 [MTT,3-(4,5-dimethylibiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide] 是一种 能接受氢原子的染料。活细胞线粒体中与 NADP 相关的脱氢酶在细胞内可将黄 色的 MTT 转化成不溶性的蓝紫色的甲 [月替 ] (formazan)，而死的细胞则无此功 能。用二甲基亚讽 (DMSO) 溶解甲 [月替 ]后，在一定波长下用酶标仪测定光密度 值，即可定量测出细胞的存活率。 1.2 操作步骤 : 1.2.1 选用对数生长期的贴壁肿瘤细胞，用胰酶消化后，用含 10％小牛血清的 RPMI l640 培养基配成 5000 个／ ml 的细胞悬液，接种在 96 孔培养板中， 每孔接 种 200 μl，37℃，5 ％CO2 培养 24 h 。 1.2.2 实验组换新的含不同浓度被测样品的培养基，对照组则换含等体积溶剂的 培养基，每组设 3～5 平行孔， 37℃，5 ％CO2 培养 4～5 d 。 1.2.3 弃去上清液，每孔加入 200 μl新鲜配制的含 0.2 mg ／ml MTT 的无血清培 养基． 37℃继续培养 4 h 。小心弃上清，并加入 200 μl DMSO，用微型超声振荡 器混匀后，在酶标仪上以试验波长为 570 nm，参比波长为 450 nm 测定光密度值。 1.3 结果评定 : 按下式计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率： 肿瘤细胞生长抑制率％＝ (1- OD 实验/OD 对照 ) ×100％ 以同一样品的不同浓度对肿