植物叶绿素含量及色层分析.ppt

光合作用-植物葉綠素含量及色層分析 壹、目的： 利用濾紙色層分析的原理，分離植物葉內與光合作用有關的各種色素以及利用丙酮萃取葉綠素，並定量葉片中葉綠素總量、類胡蘿蔔素總量、葉綠素a以及葉綠素b的含量。 貳、材料與方法 一、色層分析： 1.取乾燥植物葉片1g（每組實驗樣品不同）放入研缽中加入100% 10ml 丙酮研磨，紗布過濾，留下汁液樣本。 2.取展開液（9ml 石油醚+1ml 90％丙酮已配置好）倒入50ml量筒中約5～10ml，以鋁箔封住量筒口。 3.在長條厚濾紙一端剪成尖型箭頭，毛細管吸取汁液樣本，點在尖端３公分處，以吹風筒吹乾，重複幾次此步驟。 4.將濾紙置於量筒中，以尖形箭頭觸於展開液液面為準。注意展開液不要超越最上面（用鉛筆作記號）的標記，量筒用鋁箔紙蓋住。 5.待色素展開後，用鉛筆描出各色素輪廓，計算各色素的Rf值（Rf＝各色素移動距離/展開液移動距離） 葉綠素a 葉綠素b 葉黃素 胡蘿蔔素 展開液 移動距離 Rf值 3公分 二、葉綠素吸收光譜 1.秤取新鮮波菜葉片0.50g，先加入1.5ml 80%丙酮研磨成漿狀，再用1.5ml 90%丙酮沖洗研缽壁，以濾紙過濾，最後再加入80%丙酮至50ml，加蓋避免揮發。 2.用80%丙酮調節光電比色計的零點和滿點。 3.取步驟1配好的濾液，裝入光電比色管，放入光電比色計中，測定波長440.5nm、645nm、663nm、652nm時的吸光值。 4.代入公式求各光合色素的總量。 公式： 葉綠素a(mg)=[12.7(D663)-2.69(D645)]×[V/(1000×W)]= mg 葉綠素b(mg)=[22.9(D645)-4.68(D663)]×[V/(1000×W)]= mg 葉綠素總量(mg)=[20.2(D645)+8.02(D663)]×[V/(1000×W)]= mg 葉綠素總量(mg)=[(D652)x1000/34.5]x[V /(1000×W)]= mg 類葫蘿蔔素總量Cc(mg)=4.695x(D440.5)-0.268x C(a+b)= mg 注 Dλ:葉綠素萃取液在λ波長下的吸光度 V:葉綠素萃取液總體積 (ml) 此次實驗是用50ml W:新鮮葉片組織重 (g) 此次實驗是用0.5 g C(a+b):葉綠素的總含量 (mg) Cc:胡蘿蔔素含量 (mg) 斜體底線數字為固定數值 分光光度計使用時，分光管如出現霧狀，則請更換新的分光管進行實驗。 叁、結果 一、請將色層分析結果繪出圖表並計算。 二、請將實驗二數據填入下表。 肆、討論 伍、參考文獻 葉綠素a 葉綠素b 葉黃素 胡蘿蔔素 展開液 移動距離 Rf值 D440.5 D645 D652 D663 葉綠素a 葉綠素b 葉綠素總量 葉綠素總量 類胡羅蔔素總量 數值