荧光定量PCR实验数据资料.pptVIP

同时，这些曲线都没有明显的指数增长期。 如何判断它们是否存在扩增？ 其次，看Y轴的数值。 这些“可疑”曲线的指数增长期范围常常是落在1e-2 的范围内。 对数图 如何判断它们是否存在扩增？ 最后，查阅线性图： 曲线一直没有指数上升的趋势，提示不存在扩增。 轻微的荧光增长可能来源于探针的降解。 如何判断它们是否存在扩增？ 案例3:是否存在扩增？ 右侧的曲线形状和扩增曲线很相似，但是曲线不光滑。 切换到线性图，可以看到曲线有一定的上升。 如何判断它们是否存在扩增？ 分析 这些样品在反应的最后阶段才开始扩增，平台期很接近背景。 这些样品的扩增曲线出现了指数扩增的区段 虽然我们可以认为这些样品是临界阳性，但是对这些样品的定量结果都是不太准确的。 形成这类曲线的原因可能是模板的质量差 (RT / PCR抑制物; 模板浓度低)， 也可能是引物探针的设计问题。 试剂原因 如果使用的试剂背景信号太强，荧光的增长将会很小，导致扩增曲线的指数增长期会变得很短，或者没有。 荧光信号差的试剂也会有同样的问题。 总结：遵循扩增曲线形态第一，Ct值第二的判读原则。 查看MultiComponent Plot：是否有正常的阳性扩增曲线 查看扩增曲线的形状：是否有明显扩增阶段（指数增长期）? 指数图下扩增曲线间是否平行? 查看Y轴的数值：扩增曲线最高点的纵坐标值是否符合预期？ 在同一坐标系下查看阳性对