第4章植物细胞培养.pptx

第四章 植物细胞培养;第四章 植物细胞培养;第四章 植物细胞培养;植物细胞培养的意义： （1）研究细胞生理代谢过程及各种影响因子； （2）用于植物品种的改良； （3）用于植物次生代谢物质的生产。;细胞培养过程： 1. 择适宜的外植体； 2. 诱导疏松愈伤组织； 3. 选择适宜的培养基； 4. 悬浮培养； 5. 悬浮细胞的继代与选择； 6. 悬浮细胞的同步化； 7. 悬浮愈伤组织形成及植株再生。 ;第四章 植物细胞培养;第四章 植物细胞培养;分批培养（Batch culture）;特点;继代的方法和最佳时期;;细胞生长曲线;滞后期;细胞生长各个时期的特点：;讨论 （1）滞后期的长短主要取决于在继代时原种培养细胞所处的生长期和转入细胞数量的多少。 （2）加入条件培养基可以缩短滞后期。 条件培养基：曾培养过一段时间组织或细胞的培养基。 （3）缩短两次继代时??间隔，则可使悬浮培养的细胞一直保持对数生长期。 （4）如果使处在静止期的细胞悬浮液保持时间太长，则会引起细胞的大量死亡和解体。;操作注意事项： 对悬浮培养细胞继代时，进液口的孔径要小，只能通过单细胞或小细胞团，使用吸管或注射器。 继代前，培养容器静置短时间，大细胞团沉降，再吸上层悬浮液。可建立良好的细胞悬浮培养物。;连续培养(Continuous culture): 是用一定容积的非密闭系统进行细胞培养的方法，在培养过程中不断注入新鲜培养基，而使营养物连续得到补充，细胞生长和增殖连续进行，同时有等体积的培养物排除系统。;连续培养（Continuous culture）;开放式和封闭式区别;连续培养意义： 1、植物细胞代谢调节的研究。 2、次生物质的大量生产。;第四章 植物细胞培养;第四章 植物细胞培养;第四章 植物细胞培养;细胞的悬浮培养(cell suspension culture) 是指将游离的植物细胞按一定的细胞密度，悬浮在液体培养基中进行培养的方法。;1、起始悬浮液的制备;;第四章 植物细胞培养;第四章 植物细胞培养;第四章 植物细胞培养;;第四章 植物细胞培养;第四章 植物细胞培养;第四章 植物细胞培养;植物单细胞培养方法：;第四章 植物细胞培养;第四章 植物细胞培养;;单细胞的分离;1、由完整的植物器官分离单细胞;机械法;具体方法:;第二种方法：叶片研碎、离心; 只有薄壁组织排列松散，细胞间结触点很少时用机械法分离叶肉细胞才能取得成功。;酶解法;机械法和酶解法比较;2、由培养组织（愈伤组织）分离单细胞;由愈伤组织分离单细胞的方法： 1、将未分化、易散碎的愈伤组织转到有液体培养基的三角瓶中进行振荡培养，获得悬浮细胞液。 2、用孔径为200um的无菌网过滤，4000RPM/M离心，除去比单细胞小的碎片，获得纯净的细胞悬浮液。 3、用60-100UM的网过滤，再用20-30UM的网过滤，离心除去细胞碎片。 4、回收获得的单细胞，并用液体培养基洗衣净，可用于培养。;单倍体的应用价值： 1、在植物育种中使后代迅速纯合、提高选择效率 3、排除杂种优势对后代的影响、 4、遗传研究的良好实验材料体系，消除致死原因 5、突变体的筛选，选育新型自交系 6、遗传转化的受体材料，基因表达研究的良好材料;第四章 植物细胞培养;; 类别 次生代谢产物 用途 黄酮 银杏黄酮，大豆黄酮 治疗心血管疾病 芦丁，槲皮素 食品添加剂和化妆品 醌 胡桃醌 抗菌，镇静 紫草宁 抗菌、抗炎、抗病毒、止血 简单酚类 香豆素 香料，抗菌消炎 萜 类 紫杉醇 抗癌 青蒿素 抗疟疾 生 物 碱 长春新碱 抗癌 奎宁 抗疟疾;罂粟：吗啡、可卡因 镇痛药物;香豆素;第四章 植物细胞培养;第四章 植物细胞培养;第四章 植物细胞培养;第四章 植物细胞培养;紫杉醇：二萜类化合物 最早由太平洋红豆杉Taxus brevifolia的树皮中分离 广泛用于治疗卵巢癌、乳腺癌、非小细胞肺癌等十几种癌症 目前主要来源于红豆杉属植物;理化性质;紫杉醇研发