荧光定量pcr原理--ct值(1).pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * rRNA丰度高，占总RNA的80%，研究表达丰度较高的基因时比较适合；rRNA转录调节受其它因素影响，如28s和18s rRNA在有细分裂期间表达量明显减少或停止表达，所以在研究与细胞周期相关的基因时就不适合以此为内参；另外，由于表达量较高，在研究丰度相对较低的基因时，有时就不太适用，比如Multiplex。当然也有rRNA的忠实拥护者，有人认为表达量高才时定量准确的关键，总之各有说法，但选择看家基因最关键的地方还是看该基因在你所研究的体系下是否稳定表达，可通过选择两个看家基因在不同的处理间相互比较，看两者比值是否恒定，如果一致，那么他们都可用作这个实验的看家基因。 * * * * * * * * * * * * 拷贝数的计算： 待测样本浓度（ng/ul）＝OD260×40×稀释倍数 样本分子量=碱基数×324 待测样本拷贝数（copies/ul）=待测样本浓度/样本分子量×6×1014 倍比梯度稀释方法： 1v原液(标准品i) +9v稀释缓冲液，得标准品ii 1v标准品ii+9v稀释缓冲液，得标准品iii 1v标准品iii +9v稀释缓冲液，得标准品iv 1v标准品iv +9v稀释缓冲液，得标准品v 质粒标准品稀释方法与拷贝数计算 方 法：从血液中提取病毒DNA，以TaqMan探针法进行荧光定量检测 试