低温生物医学技术-第二讲.pptx

低温生物医学技术第二讲;低温生物医学基本原理之一-----溶液的冻结特性与细胞损伤;2.1 水-冰相图;三相点,温度为273.16K,压力为610.62Pa(冰点?);1atm,冻结点是273.15K(冰点?)，这一段是冰水平衡线(给我们什么启示?降低冰点？);是冰和水蒸气平衡线(给我们什么启示?);2.2 　纯水的冻结特性; 特别指出：d-e段的降温速率可能远大于槽温的下降速度，因此在生物细胞的低温保存中，如何控制溶液固化后的冷却速率是热控制的一个重要问题和难点。 讨论：怎么来控制？;2.3 过冷(supercooling)vs 成核(nucleation);欲产生结晶的自发过程（即b到c），必须使液体过冷到某一低于Tf的温度Tc。;成核理论; 均匀成核,是指在一个体系内各处的成核几率相等,由于热起伏(或热涨落)可能使原子或分子一时聚集成为新相的集团(又称胚芽,embryos),若胚芽大于临界尺寸r*,则成为晶核。若液相分子热起伏聚集的冰相集团尺寸大于r*，则结冰过程为自发过程。;过冷度（℃）; 非均匀成核，又称异相成核，是指水在尘埃、容器表面及其它异相表面等处形成晶核。一般所要求的过冷度比均匀成核要小得多。;在实际样品冻结过程中，过冷点（通常与冻结点混淆）具有一定的随机性！ 那我们要怎么解决这个问题？;2.4 冰晶形成生长过程及其对细胞的影响;（一）降温速率的影响;（二）“置核（seeding）”的必要性;（三）无论何种结晶，冰晶的存在都会对细胞产生致命的损伤！！ ;-135℃;Below -110C, there are small difference between Vs55 and Vs55+Fe; But they are very different at between -110C to -82C, which means Vs55 is more easy to form nuclei above -110C before devitrification. Why?;-135℃;;2.5 二元溶液的冻融特性;二元溶液冻结曲线;（一）稀溶液的依数性质;;***实际水溶液冰点降低的依数性质;（二）被冻结组织融化过程的特点; 冰的比热是水的一半，导热系数却是水的4倍，热扩散系数为8.6倍。;细胞体积随渗透压的变化（冻结过程）;怎么评估细胞体积随渗透压的变化;;;1-骨髓细胞；2-酵母细胞；3-仓鼠细胞；4-红细胞 （Mazur,1970）; 此图的重要意义在于告诉人们，对于某一种细胞和某一确定的保存方案，确实存在着某种最佳冷却速率，对应最大的存活率，而过快或过慢的冷却速率都会导致细胞的损伤，降低存活率。;细胞低温损伤的两因素假说;;;2.7 关于两因素假说的深入研究;Leibo;利用低温显微系统，定量研究了胞内冰形成和渗透过程中细胞体积的变化情况;A Microscope Diffusion Chamber For Determination Of The Equilibrium And Non-Equilibrium Osmotic Response Of Individual Cells, J. J. McGrath J. Microscopy, 139, 249-263, 1985.;华泽钊（1987）利用自行研制的低温显微系统，研究人体白细胞、肿瘤细胞、鱼胚胎时，观察到：过慢冷却时，细胞剧烈收缩，过快冷却时，出现了胞内冰。;2.8 冻结过程中的未冻水份额;获得未冻水的方法;;;;2.9 复温过程中的细胞损伤;原因;胞内冰的形成一定会对细胞产生???命的损伤吗？;;2.10 造成损伤的其他因素;下次讨论问题