实验三--聚丙烯酰胺凝胶电泳.pptVIP

（2）加液：向下电泳槽加入适量的硼酸-硼砂缓冲溶液，没过凝胶管的底部和电极，注意胶柱下方不要有气泡。 （3）加样：用胶头滴管吸取配好的样品液，沿管壁缓慢加在凝胶柱上边，加样量以凝胶管内样品液高度2~3mm为宜。加样枪不可插入过深，以免刺破凝胶，同时要缓慢、均匀，以免搅动缓冲液引起样品扩散。 （4）封液：用胶头滴管吸取电极缓冲液，沿管壁慢慢加入凝胶管上方至加满凝胶管，注意不要使缓冲液与样品液混在一起。 （5）然后向上电泳槽中加入电极缓冲液，使凝胶管的上端被缓冲液浸没，随后盖上电泳槽的槽盖。 （6）电泳：将上层电泳槽的电极接电泳仪的负极，下槽接电泳仪的正极，接通电源。调节电流为lmA／管，5min后，样品液被压缩成一薄层，调节电流为3mA／管。待示踪染料运动至凝胶管下端管口时(离管下口0.5cm)，切断电源，结束电泳（时间约为30~50min）。 4．剥胶：将上下电泳槽的缓冲液回收到试剂瓶中，取下凝胶管，以注射器吸取蒸馏水，用10cm长针头沿凝胶管壁插入胶柱与管壁之间，针头切面朝向凝胶管壁，从负极端紧贴管壁，边注水边进针，使胶柱与玻璃管松动，最终使凝胶柱从玻管中缓慢滑出。必要时用洗耳球在一端轻轻加压。(注入蒸馏水做润滑剂，针头螺旋式前进，缓缓剥离) 5．固定：12.5%三氯醋酸溶液，10min。 6．染色：考马斯亮蓝染液，60℃，10min。 7．脱色：脱色液，60℃，10min，直至