用SephadexG-25凝胶过滤层析脱盐和缓冲液置换应用报告_百度文库.doc

用Sephadex G-25凝胶 过滤层析脱盐和缓冲液置换 凝胶过滤 (或称分子筛) 层析是一种由限制分子通过多孔基质，按分子大小分离混合分子的技术 (1,2)。一般生物大分子的分子量比盐等小分子大许多倍，用凝胶过滤方法为生物产品脱盐十分简单、可靠 (3)。由于层析方法可透过紫外和电导检测器监控整个层析脱盐的过程、产品的纯度和回收率，又可以连续自动进样和收集，自动化程度高，容易放大 (4)。所以，从60年代初开始，随着层析介质技术的不断发展，Sephadex G-25系列凝胶过滤介质被越来越多地用于从实验室到工业规模的脱盐、小分子去除及缓冲液置换 (8-10)。 选择脱盐介质要考虑的因素 Sephadex G-25介质用带3-氯-1，2-环氧丙烷(epichlorohydrin) 交联葡聚糖加工成珠状的介质。适合分子量在5000以下的生物分子的脱盐及缓冲液置换工作。Sephadex G-25有粗、中、细、超细四种不同颗粒大小可选择。颗粒越小分辨率越高，但流速也越慢。图1说明不同Sephadex G-25介质一般上样体积平均在30%柱体积左右。样品在粒径粗的介质中更容易扩散，所以 SephadexG-25 Coarse (粗) 的上样量在四种介质中最少。但是由于粗颗粒介质流速快，图2显示Sephadex G-25 Coarse (粗)在每个单位时间、单位柱床体积所纯化的产品，即生产率