第六章-动植物细胞培养装置和酶反应器.ppt

第六章 动植物细胞培养装置和酶反应器 第一节 动物细胞培养反应器 第二节 植物细胞培养反应器 第三节 酶反应器 第一节 动物细胞培养反应器 动物细胞培养可生产的生物制品 1.病毒疫苗：口蹄疫(FMD)、狂犬疫苗等 2.非抗体免疫调节剂：干扰素(IFN)、白介素(IL)等 3.多肽生长因子：神经生长因子(NGF)、成纤维细胞生长因子(FGF) 4.酶：组织血纤维溶酶原激活剂(t-PA) 5.激素：红细胞生成素(EPO)、促黄体生成素(LH) 6.病毒杀虫剂 7.肿瘤特异性抗原：癌胚抗原(CEA) 8.单克隆抗体 9.皮肤重植 10.细胞 动物细胞培养生产生物制品工艺实例 1.组织纤溶酶激活剂生产工艺流程 动物细胞融合 杂 交 瘤 技 术 动物细胞培养的特点 1. 细胞生长缓慢，易受微生物污染，培养时需要抗生素； 2. 动物细胞较微生物大得多，无细胞壁，机械强度低，适应环境能力差； 3. 培养过程需氧量少，且不耐受强力通风与搅拌； 4. 在机体中，细胞相互粘连以集群形式存在； 5. 成本高，产品价格昂贵； 6. 大规模培养时，不可套用微生物反应的经验； 7. 原代培养细胞一般繁殖50代即退化死亡。 动物细胞培养的特点 性质 动物细胞 微生物细胞 大小 代谢调节方式 营养要求 生长速率 机械强度 环境适应性 10-100mm 内部和激素 苛刻 倍增时间一般为12-60h 很差，缺乏保护性细胞壁 差 10mm 内部 宽松，可利用多种底物 倍增时间一般为0.5-2h 较好 好 表　 动物细胞与微生物细胞的性质比较 性质 动物细胞 微生物细胞 pH控制 搅拌速度 溶氧控制 培养基灭菌方法 培养时间 对水纯度的要求 CO2—HCO3缓冲液 较慢 改变进入气体的氧浓度 过滤 几天~3、4周 很高 添加酸、碱 速度快、范围广 改变搅拌速度 、通气量等 高温蒸煮 几小时~几天 较低 表 动物细胞与微生物细胞的培养方法比较 体外培养的动物细胞根据它们在培养器皿是否能贴附于支持物上生长特征，可分为贴附型生长和悬浮型生长两大类。 贴附型细胞在培养时能贴附在支持物表面生长。大多数动物细胞属于贴壁型细胞，如Hela、Vero、BHK、CHO细胞系。 悬浮型细胞在培养中悬浮生长。来源于血液、淋巴组织的细胞，许多肿瘤细胞和某些转化细胞。 动物细胞培养方法 动物细胞培养方法 固定化培养 一种包埋培养。对两类细胞都适用，细胞生长密度高，抗剪切力和抗污染能力强。悬浮型细胞常用海藻酸钙包埋，贴壁型细胞常用胶原包埋。 动物细胞培养方法 无论是贴壁细胞还是悬浮细胞，深层培养的操作方式可分 细胞培养的操作方式 分批式、流加式、半连续式、连续式和灌注式。 分批式操作 操作简单、是最常用的操作方式。分批式培养过程中，细胞的生长可分为延迟期、对数生长期、减速期、平稳期和衰退期 分批式培养细胞生长曲线 流加式培养 特点： 可避免某种营养成分的初始浓度过高； 能防止营养成分在培养过程中被耗尽； 整个过程反应体积是变化的。 半连续式培养 指在分批式培养的基础上，将分批培养的培养液部分取出，并补充加入等量的新鲜培养基，使反应器内培养液的总体积保持不变。 连续式培养 连续式培养：使反应条件处于一种恒定状态。 特点：细胞所处环境条件长时间地稳定。 能提高细胞密度，应用于培养悬浮型细胞。 5、灌注培养 灌注培养：是把细胞接种后进行培养，新鲜的培养液从反应器一头不断加入，从另一头不断取出等量的培养液，细胞仍留在反应器内，使细胞处于一种营养不断的状态。 特点：高密度培养动物细胞。 动物细胞培养反应器 动物细胞培养反应器 一、通气搅拌式细胞培养反应器 工作原理:反应器运转时，圆筒以30-60r/min的速度转动，由于离心力的作用，搅拌器中心管内产生负压，使搅拌器外培养基流入中心管，沿管螺旋上升，再从导流筒口排出，从搅拌器外沿下降，形成循环流动。在气腔内气体由分布管鼓泡，气体溶于液体中，依靠气腔丝网外液体的循环流动及扩散作用，使溶于液体中的气体成分均匀地分布到反应器内。 反应器的优缺点 优点：避免向培养基直接通气时气泡损伤细胞，没有移动部件，密封好，氧转换率较高，便于放大。 缺点：氧传递系数小，气路系统不能就地灭菌。 反应器适用范围 悬浮培养：非贴壁依赖性细胞和贴壁于微载体的贴壁细胞 二、气升式细胞培养反应器 与微生物发酵及植物细胞培养的反应器结构相同。 气升式培养系统的优点： ① 没有移动部件； ② 完全密封； ③ 便于无菌操作； ④ 设计简单； ⑤ 便于放大生产； ⑥ 氧的转换率高。 细胞培养流程 三、中空纤维细胞培养反应器