病毒的分离培养与动物接种、鸡胚接种法课件.pptVIP

小白鼠脑内接种法（示教） 【材料】 1.脑炎病毒（小白鼠脑脊髓炎）悬液：脑组织先用无菌生理盐水洗去血液，再加100％脱脂奶水研磨成10毫升悬液，离心沉淀30分钟，吸取上清液。 2.小白鼠：3周龄，体重6—8克。 【方法】 1．1毫升注射器抽取脑炎病毒悬液0.1毫升，去除注射器内的气泡。 2．取出小白鼠，左手将小白鼠固定，固定时用大拇指和食指握住小白鼠的头部，左手掌轻轻按住小白鼠的体部。 3．右手以棉签蘸以碘酒，消毒小白鼠的右颊部皮毛 4．右手拿住注射器在小白鼠眼与耳根连线的中点略偏耳朵的方向注入，进入颅腔，进针2—3毫米，不要插得太深，注射量为0.02—0.03毫升。 5．注射完毕，将用过的注射器煮沸消毒，动物一般在3—4天开始发病，食欲减退，活动迟纯、耸毛、振颤、慢慢发展为麻痹瘫痪而死亡。 小白鼠滴鼻感染法（示教） 【材料】 小白鼠、流盛病毒的鼠肺适应株悬液、无消毛细吸管、无菌小试管、乙醚、棉球及动物罐等。 【方法】 1．首先将小白鼠1只投于带盖的，内放有浸蘸乙醚的棉球的容器内行全身麻醉。注意麻醉的深度，一般不宜太深或太浅，太深时易遭致麻痹死亡或吸人性肺炎，太浅则易在滴注时打喷嚏。 2．用左手取出小白鼠握在掌中，大拇指及食指抓住耳部使其头部朝前并呈仰卧位 置，另一手将吸有病毒悬液的滴管，慢慢滴于管口而不使其自然掉落呈悬滴状，将悬滴 靠至动物鼻尖，动物在呼吸时带人，一般滴入0.03—0.05毫升，不宜过多，感染材料如被吸人肺内，容易引起动物肺水肿，往往于接种后一天内死亡。 3．动物慢慢苏醒，在罐中逐日观察，通常在数日后开始发病，发病的症状常为耸毛，咳嗽、不食、甚至死亡，解剖可观察到肺脏有肺炎或出血性病灶。 鸡胚培养及病毒的鸡胚接种法 一、鸡胚的孵育 （一）鸡卵的选择 一般都选新鲜、10天以内莱亨鸡（Leghorn bird）的受精卵以保证规格质量上的一致 （二）孵育 孵育时可将鸡卵放人卵箱内进行,气室向上，孵育的最适温度为38--39℃，相对湿度为40—70％，孵育8日后，鸡卵应每天翻动1—2次，以帮助鸡胚发育匀称和防止鸡胚膜粘连。 （三）检卵 鸡卵孵育4～5天后，即可用检卵器检查鸡胚发育情况（二天一次）。 1．未受精鸡卵：在检卵器上仅见到模糊的阴影。 2．活鸡卵：鸡胚发育4天后，在检卵器上就可见到清晰的血管，鸡卵内有一小黑点（鸡胚），有明显的自然转动。 3．死胎：如果发现鸡卵血管模糊、扩张、胚胎活动呆滞或不能自主地转动，则可判断胚胎频死或已经死亡，应将其挑捡出来。 鸡胚孵育完毕后，用铅笔划出气室边缘和胚胎的位置待用。 。。 * 。。 * 。。 * 。。 * 。。 * 。。 * 。。 * 。。 * 。。 * 。。 * 。。 * 。。 * 。。 * 。。 * 。。 * 。。 * 。。 * 。。 * 。。 * 。。 * 。。 * 病毒的分离培养与动物接种、鸡胚接种法 练习内容 1．小白鼠脑内接种法 2．小白鼠滴鼻感染法 3．鸡胚尿囊腔接种法 目的要求 1．了解病毒分离的方法 2．了解病毒接种的实验途径 3．掌握鸡胚尿囊腔接种的方法与尿囊液收获的方法 病 毒 的 分 离 一、标本采取的原则 二、标本的处理 三、病毒的分离方法 一、标本采取的原则 1. 病毒标本的采取应尽早为好. 2.由于大多数病毒对热不稳定，应该立即接种，如果不能及时接种或需保存，一般置50％甘油盐水4℃或一20℃以下保存。 二、标本的处理 （一）除菌处理 粪便可加青链霉素使最终浓度为10000单位/毫升，置4℃过夜。 鼻咽拭子一般加抗生素最终浓度为2000单位/毫升，置4℃作用4小时。 对乙醚有抵抗的病毒如鼻病毒、肠道病毒、呼肠孤病毒、腺病毒、痘病毒等，则可加入等量的乙醚4℃过夜除菌。 （二）研磨和稀释 对脑、脊髓等组织标本首先应经研磨器或乳钵中充分研磨后，加稀释液（PH7.6肉汤或10％脱脂牛乳生理盐水或0.5％水解乳蛋白Hanks液）制成组织悬液，然后经2000转／分离心20分钟。必要时可加抗生素处理（同上）。 病毒的分离培养的方法 动物接种法 鸡胚培养及病毒的鸡胚接种法 组织培养与病毒的细胞感染法 动物接种法 动物接种是最原始的病毒培养方法，常用的动物有小白鼠、大白鼠、田鼠、豚鼠、 家兔，有时也用猴、猿、猩猩等。接种时要根据病毒对动物，组织细胞等嗜性不同而选 择特定的部位，如鼻腔、皮内、皮下、腹腔、脑内、静脉等（见表12—2）。 。。 * 。。 * 。。 * 。。 * 。。 * 。。 * 。。 * 。。 * 。。 * 。。 * 。。 * 。。 *