聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质.ppt

实验目的 实验原理 试剂、仪器 实验步骤 实验结果与分析 注意事项 实验目的 1.掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳分离混合蛋白质的原理。 2.熟悉聚丙烯酰胺凝胶电泳的实验方法和操作技术。 实验原理 实验原理 实验原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种电泳方法。凝胶是聚丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺交联而成的，催化剂为过硫酸铵，加速剂为TEMED。 实验原理 电荷效应 （电泳物所带电荷的差异性） 分子筛效应（凝胶的网状结构及电泳物的大小形状不同 所致） 浓 缩 效 应 浓缩效应 实验仪器、试剂 1．垂直板电泳糟 2．直流稳压电源 3．微量注射器 4．电泳仪 实验步骤 3.配置血清样品及加样 将样品梳拔出，用电极级冲液冲洗样品孔。样品与样品缓冲液按一定比例混合好（蛋白含量大约为1-2μg/μl）。用微量注射器加入加样孔，加样量为5-10μl。 4.电泳及染色、脱色 电泳：连接直流稳压电源，矮板连负极，打开电源开关。调节电流，进入分离胶之前为100v，进入分离胶之后为120v。 染色: 关闭电源，取下凝胶模。在脱色摇床上用考马斯亮兰染色1h。 脱色：将胶取出，蒸馏水冲洗数次后，放入脱色液中，数小时换液一次，直至背景清晰为止。 实验结果 注意事项 勿用手碰凝胶 勿使胶液产生气泡 凝胶聚合后勿倒入水池 电极