离体培养时Wnt3a对椭圆囊毛细胞再生的影响-学报-山东大学.pdf

　第２７卷　第５期 山 东 大 学 耳 鼻 喉 眼 学 报 ２０１３年１０月　 　Ｖｏｌ．２７　 Ｎｏ．５　 　 　 　 　 ＪＯＴＯＬＡＲＹＮＧＯＬＯＰＨＴＨＡＬＳＨＡＮＤＯＮＧＵＮＩＶ　 　 　 　 　 Ｏｃｔ．２０１３　 文章编号：１６７３３７７０（２０１３）０５００２８０４　　　ＤＯＩ：１０．６０４０／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３３７７０．０．２０１３．０６２ 离体培养时Ｗｎｔ３ａ对椭圆囊毛细胞再生的影响 １ １ １ ２ 李姝娜 ，马永明 ，钱炜 ，ＶｉｎｃｅｎｔＬｉｎ （１．江苏大学附属人民医院耳鼻咽喉头颈外科，江苏 镇江２１２００１； ２．加拿大Ｓｕｎｎｙｂｒｏｏｋ健康中心耳鼻咽喉头颈外科，多伦多，Ｍ４Ｎ３Ｍ５，加拿大） 摘要：目的　在小鼠椭圆囊体外培养模型上，通过Ｗｎｔ３ａ激活经典ＷＮＴ信号，与ＤＭＳＯ共同作用，研究其对椭圆 囊毛细胞再生的影响。方法　４０只小鼠随机分成８组。实验第一部分：小鼠椭圆囊经４ｍｍｏｌ／Ｌ新霉素处理后， 在不同浓度（０、２５、１００、２００ｎｇ／ｍＬ）Ｗｎｔ３ａ的培养液中继续培养１ｄ，培养结束后对 ｃａｔｅｎｉｎ，毛细胞纤毛及细胞核 β 进行免疫荧光染色。实验第二部分：小鼠椭圆囊经４ｍｍｏｌ／Ｌ新霉素处理后，在含２５ｎｇ／ｍＬＷｎｔ３ａ的培养液中培 养６ｄ，分别在空白对照组，５０ ｍｏｌ／ＬＤＡＰＴ、０．１％ＤＭＳＯ、５０ ｍｏｌ／ＬＤＡＰＴ＋２５ｎｇ／ｍＬＷｎｔ３ａ培养液中继续培养 μ μ ７ｄ，共培养１４ｄ。在所有培养过程中均加入１０ ｍｏｌ／ＬＢｒｄｕ。培养结束后Ｂｒｄｕ，Ｍｙｏｃｉｎ７ａ及细胞核进行免疫荧光 μ 染色。结果　实验第一部分：在２５ｎｇ／ｍＬＷｎｔ３ａ组中可见 ｃａｔｅｎｉｎ在支持细胞胞浆中有阳性表达，ｃａｔｅｎｉｎ阳 β β 性细胞数与其他各组比较差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。实验第二部分：ＤＭＳＯ组中可见Ｍｙｏｓｉｎ７ａ染色阳性 细胞，对照组、Ｗｎｔ３ａ＋ＤＡＰＴ组及ＤＡＴＰ组中可见大量Ｂｒｄｕ阳性细胞而未见Ｍｙｏｓｉｎ７ａ染色阳性细胞，ＤＭＳＯ组 中Ｍｙｏｓｉｎ７ａ阳性细胞数与其他３组相比较，组间差异具有显著性（Ｐ＜０．０１）。结论　顺序联合应用Ｗｎｔ３ａ和 ＤＭＳＯ可通过激活经典ＷＮＴ信号途径，促使椭圆囊内细胞向毛细胞样细胞转分化。 关键词：椭圆囊；Ｗｎｔ３ａ；ＤＭＳＯ；毛细胞；再生 中图分类号：Ｒ３３９．１６；Ｒ７６４．３　　　文献标志码：Ａ １ １ １ ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＷｎｔ３ａｏｎｕｔｒｉｃｌｅｈａｉｒｃｅｌｌｓｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｉｎｖｉｔｒｏ．ＬＩＳｈｕｎａ，ＭＡＹｏｎｇｍｉｎｇ，ＱＩＡＮＷｅｉ，Ｖｉｎｃｅｎｔ ２ Ｌｉｎ．１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｔｏｌａｒｙｎｇｏｌｏｇｙ＆ＨｅａｄａｎｄＮｅｃｋＳｕｒｇｅｒｙ，ｔｈｅＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＰｅｏｐｌｅ′ｓＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＪｉａｎｇｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉ ｔｙ，Ｚｈｅｎｊｉａｎｇ２１２００１，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ；２．ＯｔｏｌａｒｙｎｇｏｌｏｇｙａｎｄＨｅａｄＮｅｃｋＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＳｕｎｎｙｂｒｏｏｋＨｅａｌｔｈＳｃｉｅｎｃｅｓ Ｃｅｎｔｒｅ，Ｍ４Ｎ３Ｍ５，Ｔｏｒｏｎｔｏ，Ｃａｎａｄａ