细菌的收获和裂解.ppt

分子生物学实验 PCR扩增目的基因 实验二质粒DNA的碱法小量制备 实验步骤 (一) 细菌的收获和裂解 1. 收获 (1)将2ml含相应抗生素的ＬＢ加入到容量为15ml 并通气良好（不盖紧）的试管中，然后接入一单菌落，于30℃剧烈振摇下培养过夜。 (2) 将1.5ml培养物倒入微量离心管中，用微量离心机于4℃以12000g离心30秒，将剩余的培养物贮存于4℃。 (3) 吸去培养液，使细菌沉淀尽可能干燥。除去上清的简便方法是用一次性使用的吸头与真空管道相连，轻缓抽吸，并用吸头接触液面。当液体从管中吸出时，尽可能使吸头远离细菌沉淀，然后继续用吸头通过抽真空除去附于管壁的液滴。 2. 碱裂解法 (1)将细菌沉淀，所得重悬于100μl用冰预冷的溶液Ｉ中，剧烈振荡。 溶液Ｉ50mmol/L葡萄糖25mmol/L Tris-Cl(pH8.0)10mmol/L EDTA(pH8.0) 溶液Ｉ可成批配制，每瓶约100ml,在10lbf/in2(6.895×104Pa) 高压下蒸气灭菌15分钟，贮存于4℃。须确使细菌沉淀在溶液Ｉ中完全分散，将两个微量离心管的管底部互相接触震荡，可使沉淀迅速分散。  (2) 加200μl新配制的溶液Ⅱ。 溶液Ⅱ0.2mol/L NaOH（临用前用10mol/L贮存液现用现稀释）1%S