利用改良Nest-tetra-primerspecificPCR技术对两种石斑鱼的鉴别＊.PDF

　 19 　8 　2009 8 829 利用改良Nest-tetra-primer specific PCR 技术对 两种石斑鱼的鉴别＊ 郭明兰　苏永全　张之文　 丁少雄　王　军＊＊ , 361005 摘要　　云纹石斑鱼(Ep in ep h elus moara )和褐石斑鱼(E .br uneus)为石斑鱼属内近缘种, 外形相 似 被混淆.本研究改良建立了Nest-tetra-primer specific P R 方法, 获得了云纹石斑鱼和褐石斑 鱼线粒体DNA ND2 基因内的3 个特异性条带, 分别为内参序列N 1(394bp)、 特异性条带ND2- M (268bp)和ND2-B(122bp), 以及核基因组中核糖体DNA ITS1 区的5 个特异性条带, 分别为内 参序列N 2(588 bp)、 N 3(563bp), 特异性条带rDNA-M (426 bp)、 ITS1-M (488bp)和ITS1-B (304bp).研究结果不仅为两种石斑鱼的鉴别提供了稳定、 可靠、 快捷的特异性分子标记, 而且也 为鱼类近缘种的DNA 鉴别提供了新的途径. 关键词　　　　ND2 　I TS1 　Nest-tetra-primer specific PCR 　　Ep inep h el us moara (Temminck tion system P R), P R Schlegel, 1842 ) E .bruneus (Bloch, . 1793) Perciformes、 Serranidae、 (ARMS), P R Ep inep helus, (tetra-primer P R), ., 、 、 [ 1, 2] [7] 、 , ; . [8—12] . [2, 3] Nest-tetra-primer specific , . ., P R(1), ND2 [4] DNA ITS1 , 、 () , , ., [5] [6] ., , Tetra-primer ARMS P R, . . , 、 1 　材料与方法 . Tetra-primer ARMS P R, 1.1 　样品采集和DNA 提 P R(tetra-primer amplification refractory muta- 2005 3 2007 12 , 　2008-12-23 , 2009-02-20 　 ＊( “” (:2006AA10A414) 　＊＊, E-mail:junw @xmu.edu.cn 830 　19 　8 　2009 8 23 24 , PE9700 P R , : 18.8—30.7cm 14—34.6cm. E x Taq ( Mg2+ )2.5 μL, 2.5 mmol/L (FAO ) Group ers of t he Mg2+ 1.8μL, 10 μM 2.5 μL, 2.5 mmol/L [2] [5] Wor l d , 《》 《 dNTP 1.2μL, DNA 100ng, E x Taq 1U, [6] 》 .95%. 25 μL.:94 ℃ 50 mg, Sa