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同步培养:使群体中的细胞处于比较一致的,生长发育均处于同一阶段上,即大多数细胞能同时进行生长或分裂的培养方法。 同步生长:以同步培养方法使群体细胞能处于同一生长阶段,并同时进行分裂的生长。 五、同步生长 1.选择法 选择法的优点是在不影响细菌代谢的情况下得到同步培养,菌体生命活动较为正常。 2.诱导法 诱导同步生长的环境条件往往是可以使细菌继续生长,但特异性抑制细菌分裂,移去该抑制条件后细菌就同时出现分裂。 3.抑制DNA合成法 获得同步生长的方法: 蔗糖梯度 不同步菌群体 小细胞沉淀慢 收集各部分 小细胞培养 不同步的细胞过虑 翻转滤膜倒人培养基 新分裂的细胞被洗脱 收集段时期内的洗脱液 根据对微生物限制程度的不同,有以下三种 1.防腐或抑菌 阻止或抑制微生物的生长和繁殖。用于防腐的药品称防腐剂或抑菌剂。 2.消毒或杀菌 杀死物体中的病原微生物。用于消毒的化学药品叫消毒剂或杀菌剂。 3.灭菌 杀死物体中所有微生物。 无菌法即防止任何微生物进入目标物体的方法。抗菌即抑菌和杀菌的总称。 第二节 外界因素对微生物的影响 理化因子抑菌还是杀菌作用的相关因素: 理化因子的强度或浓度; 同一浓度理化因子作用时间的长短; 不同种类的微生物; 同种微生物的不同生长时期; 杀灭或抑制微生物的物理因素 温度 辐射作用 过滤 渗透压 干燥 超声波等 (一)温度 1.温度类群 根据微生物生长、繁殖需要的温度可将其划分为: 最低温度 最适温度 最高温度(℃ ) 低温微生物(嗜冷菌)-5~10 10~20 25~30 中温微生物(嗜温菌) 10~20 18~28 40~45 高温微生物(嗜热菌) 25~40 50~60 70~85 一、物理因素(温度、干燥、渗透压、光线、射线、滤过等) 2.高温对微生物的影响 微生物对高温比较敏感,所以用高温灭菌是常用的物理方法。不同的微生物对高温的敏感性不同,多数细菌、酵母、真菌的营养细胞和病毒50~65℃,10分钟死亡;腐生的嗜热芽孢杆菌抗热性很强一般120℃,12分钟死亡;细菌的芽胞抗热性最强,100℃以上要十多小时才致死(140℃,2~3小时)。 3.高温灭菌法 ⑴ 干热灭菌法 ①火焰灭菌 ②热空气灭菌 160℃ ,2~3小时。 注意: 温度不宜超过170℃;包装不宜过厚;排列不能过挤;灭菌过程中严禁开门。 ⑵ 湿热灭菌 ①煮沸 100 ℃ ,15分钟以上。 ②高压蒸汽灭菌法 通常是15磅,20分钟。 多数细菌和真菌的营养细胞:在60℃左右处理 5-10分钟; 酵母菌和真菌的孢子:用80℃以上温度处理; 细菌的芽孢:121℃处理15分钟以上; 湿热对一般营养体和孢子的杀灭条件: 高压蒸汽灭菌法是湿热灭菌中效果最好的一种。因为:更易于传递热量;更易破坏保持蛋白质稳定性的氢键等结构; 蛋白质的凝固变性与其含水量有关。含水量越高其凝固所需温度就越低。 蒸汽的穿透力强,可迅速引起蛋白质凝固。 蒸汽与被灭菌物体接触凝成水时,可放出热量,使温度迅速增高,从而增加灭菌效果。 使用时注意: 加热加压至2?3磅后缓缓放气至压力为0,再加热加压至要求。因为高压蒸汽灭菌不是压力的作用,而是由于蒸汽的高温致死作用。 高压灭菌锅中的空气和蒸气混合时的温度 ③间歇灭菌法 常压,100℃,15?30min,室温过夜,使芽胞萌发,反复2次。 ④巴斯德消毒法 用于牛奶、啤酒和葡萄酒等。 Ⅰ低温长时间 63?65℃ ,30分钟 Ⅱ高温短时间 71?72℃ ,15分钟 加热后应迅速冷却至10℃以下,称为冷击法,可进一步促使细胞死亡。此法基于结核杆菌的致死温度为62℃ ,15分钟而定。布氏杆菌、沙门氏菌等减少90%以上。 4.低温对微生物的影响 生长繁殖停滞,但仍能存活。 (二)干燥 微生物失去水分不仅代谢发生障碍,
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